CRISPR) ਇੱਕ ਤੀਜੀ ਪੀੜ੍ਹੀ ਦੀ ਜੀਨੋਮ ਸੰਪਾਦਨ ਤਕਨੀਕ ਹੈ: CRISPR ਨੇ ਦੁਨੀਆ ਵਿੱਚ ਕ੍ਰਾਂਤੀ ਲਿਆ ਦਿੱਤੀ

ਕਲੱਸਟਰਡ ਰੈਗੂਲਰਲੀ ਇੰਟਰਸਪੇਸਡ ਸ਼ਾਰਟ ਪੈਲਿੰਡਰੋਮਿਕ ਰੀਪੀਟਸ (CRISPR) ਇੱਕ ਤੀਜੀ ਪੀੜ੍ਹੀ ਦੀ ਜੀਨੋਮ ਐਡੀਟਿੰਗ ਤਕਨੀਕ ਹੈ ਜਿਸਨੇ ਆਪਣੇ ਉੱਚ-ਥਰੂਪੁੱਟ ਨਤੀਜਿਆਂ ਨਾਲ ਦੁਨੀਆ ਵਿੱਚ ਕ੍ਰਾਂਤੀ ਲਿਆ ਦਿੱਤੀ ਹੈ। ਇਸਦੀ ਵਰਤੋਂ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਜੈਵਿਕ ਬਿਮਾਰੀਆਂ ਅਤੇ ਲਾਗਾਂ ਦੇ ਇਲਾਜ ਲਈ ਕੀਤੀ ਗਈ ਹੈ। ਵੱਖ-ਵੱਖ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਅਤੇ ਹੋਰ ਪ੍ਰੋਕੈਰੀਓਟਸ (ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਆਰਕੀਆ) ਵਿੱਚ ਫੇਜਾਂ ਤੋਂ ਬਚਾਅ ਲਈ CRISPR/Cas9 ਸਿਸਟਮ ਵੀ ਹੁੰਦੇ ਹਨ। ਇਹ ਰਿਪੋਰਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ ਕਿ CRISPR/Cas9-ਅਧਾਰਿਤ ਰਣਨੀਤੀਆਂ ਸੰਭਾਵੀ ਤੌਰ 'ਤੇ ਬਦਲੇ ਹੋਏ ਪ੍ਰਤੀਰੋਧ ਜੀਨਾਂ, ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ, ਅਤੇ ਐਪੀਜੇਨੇਟਿਕ ਰੈਗੂਲੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਬਣਾ ਕੇ ਟ੍ਰਿਪਲ ਨੈਗੇਟਿਵ ਬ੍ਰੈਸਟ ਕੈਂਸਰ (TNBC) ਦੇ ਵਾਧੇ ਅਤੇ ਪ੍ਰਗਤੀ ਨੂੰ ਰੋਕ ਸਕਦੀਆਂ ਹਨ। ਇਹ ਇਲਾਜ ਸੰਬੰਧੀ ਦਖਲਅੰਦਾਜ਼ੀ TNBC ਵਿੱਚ ਵੀ ਦੇਖੇ ਗਏ ਡਰੱਗ ਪ੍ਰਤੀਰੋਧ ਵਰਗੀਆਂ ਚੁਣੌਤੀਪੂਰਨ ਸਮੱਸਿਆਵਾਂ ਨੂੰ ਹੱਲ ਕਰਨ ਵਿੱਚ ਮਦਦ ਕਰ ਸਕਦੀਆਂ ਹਨ। ਵਰਤਮਾਨ ਵਿੱਚ, ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਬਣਾਉਣ ਲਈ CRISPR/Cas9 ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਨ ਲਈ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਤਰੀਕਿਆਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਭੌਤਿਕ (ਮਾਈਕ੍ਰੋਇੰਜੈਕਸ਼ਨ, ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਪੋਰੇਸ਼ਨ ਅਤੇ ਹਾਈਡ੍ਰੋਡਾਇਨਾਮਿਕ ਮੋਡ), ਵਾਇਰਲ (ਐਡੀਨੋ-ਸਬੰਧਤ ਵਾਇਰਸ ਅਤੇ ਲੈਂਟੀਵਾਇਰਸ) ਅਤੇ ਗੈਰ-ਵਾਇਰਲ (ਲਿਪੋਸੋਮ ਅਤੇ ਲਿਪਿਡ ਨੈਨੋਪਾਰਟਿਕਲ) - ਕਣ)। ਹਾਲਾਂਕਿ TNBC ਦੇ ਅਣੂ ਕਾਰਨਾਂ ਦਾ ਅਧਿਐਨ ਕਰਨ ਲਈ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਮਾਡਲ ਵਿਕਸਤ ਕੀਤੇ ਗਏ ਹਨ, ਪਰ ਜੀਨੋਮ ਸੰਪਾਦਨ ਸਾਧਨਾਂ ਨੂੰ ਵਿਵੋ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਨ ਲਈ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ ਅਤੇ ਨਿਸ਼ਾਨਾਬੱਧ ਤਰੀਕਿਆਂ ਦੀ ਘਾਟ ਉਹਨਾਂ ਦੇ ਕਲੀਨਿਕਲ ਉਪਯੋਗ ਨੂੰ ਸੀਮਤ ਕਰਦੀ ਹੈ। ਸੰਖੇਪ ਵਿੱਚ, ਇਹ ਸਮੀਖਿਆ ਮੌਜੂਦਾ ਸਬੂਤਾਂ ਦੇ ਆਧਾਰ 'ਤੇ TNBC ਲਈ CRISPR/Cas9 ਇਲਾਜ ਦੀ ਪ੍ਰਗਤੀ, ਚੁਣੌਤੀਆਂ, ਸੀਮਾਵਾਂ ਅਤੇ ਸੰਭਾਵਨਾਵਾਂ ਦੀ ਵਿਆਪਕ ਜਾਂਚ ਕਰਦੀ ਹੈ। ਅਸੀਂ ਇਹ ਵੀ ਉਜਾਗਰ ਕਰਦੇ ਹਾਂ ਕਿ ਕਿਵੇਂ ਆਰਟੀਫੀਸ਼ੀਅਲ ਇੰਟੈਲੀਜੈਂਸ ਅਤੇ ਮਸ਼ੀਨ ਲਰਨਿੰਗ ਦਾ ਸੁਮੇਲ TNBC ਦੇ ਇਲਾਜ ਵਿੱਚ CRISPR/Cas9 ਰਣਨੀਤੀਆਂ ਨੂੰ ਬਿਹਤਰ ਬਣਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
ਕੈਂਸਰ ਦੀ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਬੇਕਾਬੂ ਸੈੱਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨ, ਸੈੱਲ ਚੱਕਰ ਚੈਕਪੁਆਇੰਟਸ ਵਿੱਚ ਵਿਘਨ, ਅਤੇ ਟਿਊਮਰ ਸਪ੍ਰੈਸਰ ਜੀਨਾਂ (TSGs) ਵਿੱਚ ਪਰਿਵਰਤਨ (ਮੈਥਿਊਜ਼ ਐਟ ਅਲ., 2022) ਦੁਆਰਾ ਹੁੰਦੀ ਹੈ। ਕੈਂਸਰ ਦੀਆਂ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਕਿਸਮਾਂ ਵਿੱਚੋਂ, ਛਾਤੀ ਦਾ ਕੈਂਸਰ ਔਰਤਾਂ ਵਿੱਚ ਸਭ ਤੋਂ ਆਮ ਕਿਸਮ ਦਾ ਕੈਂਸਰ ਹੈ ਅਤੇ ਦੁਨੀਆ ਭਰ ਵਿੱਚ ਇਸਦੀ ਮੌਤ ਦਰ ਉੱਚ ਹੈ (ਵਾਕਸ ਅਤੇ ਵਿਨਰ, 2019)। ਛਾਤੀ ਦਾ ਕੈਂਸਰ ਇੱਕ ਵਿਭਿੰਨ ਬਿਮਾਰੀ ਹੈ ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਵਿਭਿੰਨ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾਵਾਂ ਹਨ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਹਿਸਟੋਲੋਜੀਕਲ ਅਤੇ ਜੈਵਿਕ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾਵਾਂ, ਕਲੀਨਿਕਲ ਪੇਸ਼ਕਾਰੀ ਅਤੇ ਵਿਵਹਾਰ, ਅਤੇ ਇਲਾਜ ਪ੍ਰਤੀ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ (ਵੀਗੇਲਟ ਐਟ ਅਲ., 2010)। ਛਾਤੀ ਦੇ ਕੈਂਸਰ ਵਰਗੀਕਰਨ ਛਾਤੀ ਦੇ ਕੈਂਸਰ ਦੇ ਨਿਦਾਨ ਅਤੇ ਟਿਊਮਰ ਪੂਰਵ-ਅਨੁਮਾਨ ਲਈ ਸਟੀਕ ਸੂਝ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਛਾਤੀ ਦੇ ਕੈਂਸਰ ਦੇ ਵਰਗੀਕਰਨ ਲਈ ਆਮ ਬਾਇਓਮਾਰਕਰਾਂ ਅਤੇ ਕਲੀਨਿਕੋਪੈਥੋਲੋਜੀਕਲ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾਵਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਮੁੱਖ ਮਾਪਦੰਡ ਰਹੀ ਹੈ (ਤਸਾਂਗ ਅਤੇ ਤਸੇ, 2019)। ਛਾਤੀ ਦੇ ਕੈਂਸਰ ਦੇ ਇਲਾਜ ਲਈ ਪੂਰਵ-ਅਨੁਮਾਨ ਅਤੇ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਕਈ ਕਾਰਕਾਂ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਐਸਟ੍ਰੋਜਨ ਰੀਸੈਪਟਰ (ER), ਪ੍ਰੋਜੇਸਟ੍ਰੋਨ ਰੀਸੈਪਟਰ (PR), ਮਨੁੱਖੀ ਐਪੀਡਰਮਲ ਵਿਕਾਸ ਕਾਰਕ ਰੀਸੈਪਟਰ 2 (HER2/neu), ਅਤੇ ਹਿਸਟੋਲੋਜੀਕਲ ਗ੍ਰੇਡ, ਟਿਊਮਰ ਕਿਸਮ, ਅਤੇ ਗ੍ਰੇਡ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ। ਆਕਾਰ ਅਤੇ ਲਿੰਫ ਨੋਡ ਮੈਟਾਸਟੈਸਿਸ (ਅਲ-ਤੁਬੈਤੀ, 2020)। ਛਾਤੀ ਦੇ ਕੈਂਸਰ ਦੇ ਪੰਜ ਅੰਦਰੂਨੀ ਅਣੂ ਉਪ-ਕਿਸਮਾਂ ਦੀ ਪਛਾਣ ਕੀਤੀ ਗਈ ਹੈ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਲੂਮਿਨਲ ਏ, ਲੂਮਿਨਲ ਬੀ, HER2-ਅਮੀਰ, ਬੇਸਲ-ਵਰਗੇ, ਅਤੇ ਕਲਾਉਡਿਨ-ਲੋ (ਪ੍ਰੈਟ ਐਟ ਅਲ., 2015) ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ। TNBC ਕੈਂਸਰ ਦਾ ਇੱਕ ਅਣੂ ਉਪ-ਕਿਸਮ ਹੈ ਜੋ ਸਾਰੇ ER, PR, ਅਤੇ HER2 (ਯਿਨ ਐਟ ਅਲ., 2020) ਨੂੰ ਪ੍ਰਗਟ ਨਹੀਂ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਇਹ ਰੋਗ ਸੰਬੰਧੀ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾਵਾਂ TNBC ਨਾਲ ਜੁੜੀਆਂ ਹੋਈਆਂ ਹਨ, ਜੋ ਇਸਦੀ ਤੇਜ਼ ਪ੍ਰਗਤੀ ਅਤੇ ਕਿਸੇ ਵੀ ਹੋਰ ਕਿਸਮ ਦੇ ਛਾਤੀ ਦੇ ਕੈਂਸਰ ਨਾਲੋਂ ਵਧੇਰੇ ਹਮਲਾਵਰ ਪ੍ਰਕਿਰਤੀ ਦੀ ਪੁਸ਼ਟੀ ਕਰਦੀਆਂ ਹਨ (ਫੇਂਗ ਐਟ ਅਲ., 2018)। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਪੇਰੂ ਐਟ ਅਲ (2000) ਨੇ ਛਾਤੀ ਦੇ ਕੈਂਸਰ ਨੂੰ ਮੁੜ ਵਰਗੀਕ੍ਰਿਤ ਕਰਨ ਅਤੇ ਛਾਤੀ ਦੇ ਕੈਂਸਰ ਦੇ ਪੰਜ ਅੰਦਰੂਨੀ ਉਪ-ਕਿਸਮਾਂ ਦੀ ਪਛਾਣ ਕਰਨ ਲਈ ਮਾਈਕ੍ਰੋਐਰੇ ਤਕਨਾਲੋਜੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ (ਕੈਡੇਨਾਸ, 2012)। ਬੇਸਲ-ਵਰਗੇ ਛਾਤੀ ਦਾ ਕੈਂਸਰ ਛਾਤੀ ਦੇ ਕੈਂਸਰ ਦਾ ਇੱਕ ਉਪ-ਕਿਸਮ ਹੈ ਜਿਸਦਾ ਟ੍ਰਿਪਲ-ਨੈਗੇਟਿਵ ਫੀਨੋਟਾਈਪ ਹੈ ਅਤੇ ਇਹ ਤੇਜ਼ ਪ੍ਰਗਤੀ ਨਾਲ ਜੁੜਿਆ ਹੋਇਆ ਹੈ। ਇਹ ਧਿਆਨ ਵਿੱਚ ਰੱਖਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ ਕਿ ਸਾਰੇ ਬੇਸਲ-ਵਰਗੇ ਛਾਤੀ ਦੇ ਕੈਂਸਰਾਂ ਨੂੰ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ TNBC ਵਜੋਂ ਗਲਤ ਨਿਦਾਨ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਪਰ ਸਿਰਫ 77% TNBC ਹਨ; ਇਸਦੇ ਉਲਟ, TNBC ਦੇ 71-91% ਬੇਸਲ-ਵਰਗੇ ਹਨ, ਜੋ ਇਹ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ ਕਿ ਇਹ ਦੋ ਕਿਸਮਾਂ ਦੇ ਛਾਤੀ ਦੇ ਕੈਂਸਰ ਓਵਰਲੈਪ ਹੁੰਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਵਰਗੀਕਰਨਾਂ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ (ਵੈਂਗ ਡੀ.-ਵਾਈ. ਐਟ ਅਲ., 2019)। ਇਹ ਪੂਰਵ-ਅਨੁਮਾਨ ਨੂੰ ਸਪੱਸ਼ਟ ਕਰਨ ਅਤੇ ਮੌਜੂਦਾ ਅਤੇ ਭਵਿੱਖ ਦੇ ਇਲਾਜਾਂ ਲਈ ਸੰਭਾਵੀ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆਵਾਂ ਦੀ ਪਛਾਣ ਕਰਨ ਲਈ TNBC ਦੀ ਵਿਭਿੰਨਤਾ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਣ ਦੀ ਜ਼ਰੂਰਤ ਪੈਦਾ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, TNBC ਸਾਰੇ ਛਾਤੀ ਦੇ ਕੈਂਸਰ ਦੇ ਮਾਮਲਿਆਂ ਵਿੱਚੋਂ 15-20% ਲਈ ਜ਼ਿੰਮੇਵਾਰ ਹੈ ਅਤੇ 50 ਸਾਲ ਤੋਂ ਘੱਟ ਉਮਰ ਦੀਆਂ ਔਰਤਾਂ ਵਿੱਚ ਵਧੇਰੇ ਆਮ ਹੈ। TNBC ਦੇ ਲਗਭਗ 20% ਮਾਮਲਿਆਂ ਵਿੱਚ BRCA1 ਜਾਂ BRCA2 ਪਰਿਵਰਤਨ ਦੀ ਰਿਪੋਰਟ ਕੀਤੀ ਗਈ ਹੈ (Xie et al., 2017; Tzikas et al., 2017)। , 2020)। ਅਧਿਐਨਾਂ ਨੇ ਇਹ ਵੀ ਦਿਖਾਇਆ ਹੈ ਕਿ TNBC ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਵੱਖਰਾ ਇਮਿਊਨ ਸੂਖਮ ਵਾਤਾਵਰਣ ਹੈ ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਉੱਚ ਪੱਧਰੀ ਨਾੜੀ ਐਂਡੋਥੈਲੀਅਲ ਵਿਕਾਸ ਕਾਰਕ, ਟਿਊਮਰ-ਸਬੰਧਤ ਮੈਕਰੋਫੈਜ (TAMs), ਟਿਊਮਰ-ਇਨਫਿਲਟ੍ਰੇਟਿੰਗ ਲਿਮਫੋਸਾਈਟਸ (TILs), ਅਤੇ ਟਿਊਮਰ ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਅਤੇ ਪ੍ਰਵਾਸ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਹੋਰ ਅਣੂ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ। ਇਸ ਲਈ, TNBC ਦੇ ਸੂਖਮ ਵਾਤਾਵਰਣ ਨੂੰ ਸਮਝਣਾ ਇਸਦੇ ਪੂਰਵ-ਅਨੁਮਾਨ ਅਤੇ ਇਲਾਜ ਲਈ ਬਹੁਤ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹੈ (ਫੈਨ ਅਤੇ ਹੀ, 2022)।
TNBC ਦੇ ਪੂਰਵ-ਅਨੁਮਾਨ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕਰਨ ਅਤੇ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ਇਲਾਜ ਨੂੰ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਣ ਲਈ, ਸਹੀ ਨਿਦਾਨ, ਮੁੱਖ ਤੌਰ 'ਤੇ ER, PR ਅਤੇ HER2 ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾਉਣ ਲਈ ਇਮਯੂਨੋਹਿਸਟੋਕੈਮਿਸਟਰੀ (IHC) 'ਤੇ ਅਧਾਰਤ, ਅਤੇ ਛਾਤੀ ਦੇ ਨਿਓਪਲਾਸਮ ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾਉਣ ਲਈ ਮੈਮੋਗ੍ਰਾਫੀ, ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹੈ। ਹਾਲਾਂਕਿ, ਮੈਮੋਗ੍ਰਾਫੀ ਨੈਕਰੋਸਿਸ ਅਤੇ ਫਾਈਬਰੋਸਿਸ ਵਰਗੀਆਂ ਅੰਦਰੂਨੀ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾਵਾਂ ਨੂੰ ਢੁਕਵੇਂ ਢੰਗ ਨਾਲ ਨਹੀਂ ਦਰਸਾ ਸਕਦੀ (ਦੀਪਕ ਸਿੰਘ ਐਟ ਅਲ., 2021)। ਕਿਉਂਕਿ ਮਾੜੀ ਪੂਰਵ-ਅਨੁਮਾਨ ਅਤੇ ਨਿਦਾਨ ਡਾਕਟਰਾਂ ਨੂੰ ਸਹੀ ਦਵਾਈਆਂ ਲਿਖਣ ਤੋਂ ਰੋਕਦੇ ਹਨ (ਚੌਧਰੀ, 2020), TNBC ਵਾਲੇ ਮਰੀਜ਼ਾਂ ਦੀ ਦੇਖਭਾਲ ਨੂੰ ਬਿਹਤਰ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਕਈ ਰਣਨੀਤੀਆਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ। ਵਰਤਮਾਨ ਵਿੱਚ, TNBC ਵਾਲੇ ਮਰੀਜ਼ਾਂ ਵਿੱਚ ਦੋ ਦਵਾਈਆਂ, ਡੌਕਸੋਰੂਬਿਸਿਨ ਅਤੇ ਸਾਈਕਲੋਫੋਸਫਾਮਾਈਡ, ਵਰਤੀਆਂ ਜਾਂਦੀਆਂ ਹਨ ਅਤੇ ਚੰਗੇ ਨਤੀਜੇ ਦਿਖਾਏ ਹਨ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਹੋਰ ਪਲੈਟੀਨਮ ਦਵਾਈਆਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਕਾਰਬੋਪਲਾਟਿਨ ਅਤੇ ਸਿਸਪਲੇਟਿਨ (ਸਿਕੋਵ ਐਟ ਅਲ., 2015)। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, PARP ਇਨਿਹਿਬਟਰ ਜਿਵੇਂ ਕਿ Olaparib, Velaparib, ਅਤੇ PF-01367338 ਨੂੰ TNBC ਦੇ ਇਲਾਜ ਲਈ ਸੰਭਾਵੀ ਕੀਮੋਥੈਰੇਪੀ ਦਵਾਈਆਂ ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਹੈ (Ishino et al., 2018)। ਕਿਉਂਕਿ Wnt/b-Catenin, NOTCH, ਅਤੇ Hedgehog ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਮਾਰਗਾਂ ਨੂੰ TNBC ਦੇ ਵਾਪਰਨ ਅਤੇ ਪ੍ਰਗਤੀ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਦੱਸਿਆ ਗਿਆ ਹੈ, ਇਹਨਾਂ ਮਾਰਗਾਂ ਲਈ ਦਵਾਈਆਂ ਨੂੰ ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਬਣਾਉਣਾ ਇੱਕ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਰਣਨੀਤੀ ਹੋ ਸਕਦੀ ਹੈ (Aysola et al., 2013)। ਹਾਲਾਂਕਿ ਸਰਜਰੀ, ਰੇਡੀਏਸ਼ਨ ਥੈਰੇਪੀ ਅਤੇ ਕੀਮੋਥੈਰੇਪੀ ਅੱਜ TNBC ਲਈ ਇਲਾਜ ਦਾ ਮੁੱਖ ਆਧਾਰ ਬਣੇ ਹੋਏ ਹਨ, ਟਾਰਗੇਟਡ ਥੈਰੇਪੀ, ਇਮਯੂਨੋਥੈਰੇਪੀ, ਵੱਖ-ਵੱਖ CRISPR-ਸਬੰਧਤ ਜੀਨ ਸੰਪਾਦਨ ਸਾਧਨਾਂ ਜਿਵੇਂ ਕਿ Cas9n, dCas9, CRISPR/Cas12, ਪ੍ਰਾਈਮ ਐਡੀਟਿੰਗ, ਅਤੇ CRISPR/Cas9-ਟਾਰਗੇਟਡ ਜੀਨ ਥੈਰੇਪੀ ਸਮੇਤ ਨਵੇਂ ਇਲਾਜਾਂ ਨੂੰ ਵਿਕਸਤ ਕਰਨ ਵਿੱਚ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਪ੍ਰਗਤੀ ਹੋਈ ਹੈ। ਇੱਥੇ ਅਸੀਂ TNBC ਦੇ ਇਲਾਜ ਵਿੱਚ ਵਰਤੇ ਜਾਣ ਵਾਲੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ CRISPR-ਸਬੰਧਤ ਜੀਨ ਸੰਪਾਦਨ ਸਾਧਨਾਂ 'ਤੇ ਧਿਆਨ ਕੇਂਦਰਿਤ ਕਰਾਂਗੇ। ਉਨ੍ਹਾਂ ਵਿੱਚੋਂ, CRISPR/Cas9 ਨੂੰ ਵਿਆਪਕ ਧਿਆਨ ਮਿਲਿਆ ਹੈ।
Cas9n, ਜਿਸਨੂੰ Cas9 ਨਿੱਕੇਸ ਵੀ ਕਿਹਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, CRISPR/Cas9 ਜੀਨੋਮ ਐਡੀਟਿੰਗ ਸਿਸਟਮ (ਗੁਪਤਾ ਐਟ ਅਲ., 2019) ਤੋਂ ਪ੍ਰਾਪਤ Cas9 ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦਾ ਇੱਕ ਜੈਨੇਟਿਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਇੰਜੀਨੀਅਰਡ ਰੂਪ ਹੈ। ਇਸਦੇ ਅਸਲ ਰੂਪ ਵਿੱਚ, Cas9 ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਵਿੱਚ ਦੋ ਨਿਊਕਲੀਜ਼ ਡੋਮੇਨ ਹੁੰਦੇ ਹਨ: RuvC ਅਤੇ HNH, ਜਿਸਦਾ ਮੁੱਖ ਕੰਮ ਦੋਵਾਂ DNA ਸਟ੍ਰੈਂਡਾਂ ਦਾ ਕਲੀਵੇਜ ਹੈ। ਹਾਲਾਂਕਿ, Cas9n ਵਿੱਚ, ਨਿਊਕਲੀਜ਼ ਡੋਮੇਨਾਂ ਵਿੱਚੋਂ ਇੱਕ, HNH, ਜੈਨੇਟਿਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਪਰਿਵਰਤਿਤ ਹੁੰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਅਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਹੋ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਲਈ, Cas9n ਦਾ HNH ਡੋਮੇਨ ਗੈਰ-ਕਾਰਜਸ਼ੀਲ ਰਹਿੰਦਾ ਹੈ। ਸਿਰਫ਼ RuvC ਡੋਮੇਨ ਹੀ ਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਰਹਿੰਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਨਾਲ Cas9n ਸਿੰਗਲ DNA ਸਟ੍ਰੈਂਡਾਂ 'ਤੇ ਬ੍ਰੇਕ ਕੱਟ ਸਕਦਾ ਹੈ ਜਾਂ ਬਣਾ ਸਕਦਾ ਹੈ (ਟ੍ਰੇਵਿਨੋ ਅਤੇ ਝਾਂਗ, 2014)। Cas9 ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ, Cas9n ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ਢੰਗ ਨਾਲ ਆਫ-ਟਾਰਗੇਟ ਪ੍ਰਭਾਵਾਂ ਨੂੰ ਘਟਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਸੈੱਲ ਮੁਰੰਮਤ ਵਿਧੀਆਂ ਨੂੰ ਸਹੀ ਢੰਗ ਨਾਲ ਸੁਧਾਰ ਸਕਦਾ ਹੈ। Cas9n ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਈ ਸਮੱਸਿਆਵਾਂ ਨੂੰ ਹੱਲ ਕਰਨ ਲਈ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਡਬਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡਡ DNA ਵਿੱਚ ਖਾਸ ਸਥਾਨਾਂ 'ਤੇ ਬ੍ਰੇਕ ਬਣਾਉਣਾ। ਇਸ ਉਦੇਸ਼ ਲਈ, ਦੋ Cas9n ਅਣੂਆਂ ਨੂੰ ਜੋੜਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਇਕੱਠੇ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਸੀ (Yee, 2016)। ਮਿਕਸਡ ਲਾਈਨੇਜ ਕਿਨੇਜ਼ 3 (MLK3) ਇੱਕ ਮਾਈਟੋਜਨ-ਐਕਟੀਵੇਟਿਡ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਕਿਨੇਜ਼ ਹੈ ਜੋ TNBC ਮੈਟਾਸਟੈਸਿਸ ਦੌਰਾਨ ਇੱਕ ਮੁੱਖ ਰੈਗੂਲੇਟਰ ਵਜੋਂ ਕੰਮ ਕਰਦਾ ਹੈ (ਕ੍ਰੋਨਨ ਐਟ ਅਲ., 2012)।
MLK3 TNBC ਮੈਟਾਸਟੈਸਿਸ ਵੱਲ ਲੈ ਜਾਣ ਵਾਲੇ ਕਈ ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਮਾਰਗਾਂ ਨੂੰ ਸਰਗਰਮ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਉਦਾਹਰਨ ਲਈ, c-Jun N-ਟਰਮੀਨਲ ਕਿਨੇਜ਼ (JNK) ਮਾਰਗ ਸੈੱਲ ਗਤੀਸ਼ੀਲਤਾ ਅਤੇ ਬਾਹਰੀ ਸੈਲੂਲਰ ਮੈਟ੍ਰਿਕਸ ਡਿਗਰੇਡੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਨਿਯੰਤ੍ਰਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ MLK3 JNK ਮਾਰਗ ਨੂੰ ਸਰਗਰਮ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਸੈੱਲ ਗਤੀਸ਼ੀਲਤਾ ਵਧਦੀ ਹੈ ਅਤੇ ਹਮਲਾਵਰ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾਵਾਂ ਪ੍ਰਦਾਨ ਹੁੰਦੀਆਂ ਹਨ (ਰੱਟਨਾਸਿੰਚਾਈ ਅਤੇ ਗੈਲੋ, 2016)। MLK3 EMT ਨੂੰ ਵੀ ਨਿਯੰਤ੍ਰਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਅਜਿਹਾ ਕਰਨ ਲਈ, ਇਹ ਸਨੇਲ, ਸਲੱਗ ਅਤੇ ਟਵਿਸਟ ਵਰਗੇ ਡਾਊਨਸਟ੍ਰੀਮ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ ਕਾਰਕਾਂ ਨੂੰ ਸਰਗਰਮ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਇਹ ਕਾਰਕ ਐਪੀਥੀਲੀਅਲ ਮਾਰਕਰਾਂ ਦੇ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਨੂੰ ਰੋਕਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਮੇਸੇਨਚਾਈਮਲ ਮਾਰਕਰਾਂ ਦੇ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਨੂੰ ਉਤਸ਼ਾਹਿਤ ਕਰਦੇ ਹਨ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਇੱਕ ਮੈਟਾਸਟੈਟਿਕ ਫੀਨੋਟਾਈਪ (ਕੈਸਾਲਿਨੋ ਐਟ ਅਲ., 2023) ਦੀ ਪ੍ਰਾਪਤੀ ਹੁੰਦੀ ਹੈ। MLK3 ਨੂੰ ECM ਰੀਮਾਡਲਿੰਗ ਅਤੇ ਮੈਟ੍ਰਿਕਸ ਮੈਟਾਲੋਪ੍ਰੋਟੀਨੇਸ (MMPs) ਵਰਗੇ ਪ੍ਰੋਟੀਏਜ਼ ਦੇ ਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲਤਾ ਵਿੱਚ ਭੂਮਿਕਾ ਨਿਭਾਉਣ ਲਈ ਦੇਖਿਆ ਗਿਆ ਹੈ ਜੋ ECM ਨੂੰ ਘਟਾਉਂਦੇ ਹਨ। ਇਹ ਟਿਊਮਰ ਸੈੱਲ ਹਮਲੇ ਅਤੇ ਦੂਰ-ਦੁਰਾਡੇ ਸਥਾਨਾਂ 'ਤੇ ਫੈਲਣ ਦੀ ਸਹੂਲਤ ਦਿੰਦਾ ਹੈ (ਕਟਾਰੀ ਐਟ ਅਲ., 2019)। ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ, ਪਿਛਲੇ ਅਧਿਐਨਾਂ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਹੈ ਕਿ MLK3 TNBC ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਭੂਮਿਕਾ ਨਿਭਾਉਂਦਾ ਹੈ। ਰਤਨਾਸਿੰਚਾਈ ਅਤੇ ਗੈਲੋ ਨੇ MLK3 ਦੀ ਭੂਮਿਕਾ ਦਾ ਅਧਿਐਨ ਕਰਨ ਲਈ TNBC ਮਾਡਲਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਅਤੇ ਪਾਇਆ ਕਿ ਇਹ ਖਾਸ ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਮਾਰਗਾਂ ਰਾਹੀਂ ਕੈਂਸਰ ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਨੂੰ ਉਤਸ਼ਾਹਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਉਨ੍ਹਾਂ ਨੇ MLK3 ਨੂੰ ਸੰਪਾਦਿਤ ਕਰਨ ਲਈ CRISPR/Cas9n ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਅਤੇ TNBC ਮੈਟਾਸਟੈਸਿਸ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਕਮੀ ਦੇਖੀ (ਰਤਨਾਸਿੰਚਾਈ ਅਤੇ ਗੈਲੋ, 2016)।
dCas9, ਜਿਸਨੂੰ ਅਕਸਰ ਨਿਸ਼ਕਿਰਿਆ Cas9 ਕਿਹਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, Cas9 ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦਾ ਇੱਕ ਸੋਧਿਆ ਹੋਇਆ ਡੈਰੀਵੇਟਿਵ ਰੂਪ ਹੈ। ਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ Cas9 ਦੇ ਉਲਟ, dCas9 ਵਿੱਚ ਐਂਡੋਨਿਊਕਲੀਜ਼ ਗਤੀਵਿਧੀ ਦੀ ਘਾਟ ਹੈ, ਜਿਸ ਕਾਰਨ ਇਹ DNA ਡਬਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਬ੍ਰੇਕ ਨੂੰ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਰਨ ਵਿੱਚ ਅਸਮਰੱਥ ਹੈ। ਇਸ ਲਈ, dCas9 ਨੂੰ DNA ਕ੍ਰਮ ਵਿੱਚ ਕਿਸੇ ਵੀ ਬਦਲਾਅ ਜਾਂ ਸੋਧਾਂ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਜੀਨੋਮ ਦੇ ਖਾਸ ਖੇਤਰਾਂ ਨੂੰ ਸਹੀ ਢੰਗ ਨਾਲ ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ (ਵੈਂਗ ਐਟ ਅਲ., 2016)। dCas9 ਵਿੱਚ, ਦੋ ਐਂਡੋਨਿਊਕਲੀਜ਼ ਪ੍ਰੋਟੀਨ, RuvC ਅਤੇ HNH, ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਅਮੀਨੋ ਐਸਿਡ ਅਵਸ਼ੇਸ਼ਾਂ ਨੂੰ ਦਬਾ ਕੇ ਅਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਹੋ ਜਾਂਦੇ ਹਨ। (ਰਿਕਟਰ ਐਟ ਅਲ., 2016)। DNA ਕਲੀਵੇਜ ਗਤੀਵਿਧੀ ਦੀ ਘਾਟ ਦੇ ਬਾਵਜੂਦ, dCas9 ਜੈਨੇਟਿਕ ਖੋਜ ਅਤੇ ਬਾਇਓਟੈਕਨਾਲੋਜੀ ਵਿੱਚ ਕਈ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਭੂਮਿਕਾਵਾਂ ਨਿਭਾਉਂਦਾ ਹੈ। ਉਦਾਹਰਨ ਲਈ, ਇਹ ਜੀਨੋਮ ਦੇ ਖਾਸ ਖੇਤਰਾਂ ਦੇ ਦ੍ਰਿਸ਼ਟੀਕੋਣ ਦੀ ਆਗਿਆ ਦਿੰਦਾ ਹੈ, ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨਲ ਨਿਯਮਨ ਦੀ ਸਹੂਲਤ ਦਿੰਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਐਪੀਜੇਨੇਟਿਕ ਸੋਧਾਂ ਨੂੰ ਉਤਸ਼ਾਹਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ (ਬ੍ਰੋਕਨ ਐਟ ਅਲ., 2018)।
ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ ਫੈਕਟਰ ZEB1 (ਜ਼ਿੰਕ ਫਿੰਗਰ ਈ-ਬਾਕਸ ਬਾਈਡਿੰਗ ਹੋਮਿਓਬਾਕਸ 1) ਐਪੀਥੈਲਿਅਲ-ਮੇਸੇਨਚਾਈਮਲ ਟ੍ਰਾਂਜਿਸ਼ਨ (EMT) ਵਿੱਚ ਵਿਚੋਲਗੀ ਕਰਨ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਖਾਸ ਅਤੇ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਭੂਮਿਕਾ ਨਿਭਾਉਂਦਾ ਹੈ, ਇੱਕ ਸੈਲੂਲਰ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਜੋ ਭਰੂਣ ਵਿਕਾਸ, ਟਿਸ਼ੂ ਮੁਰੰਮਤ, ਅਤੇ ਕੈਂਸਰ ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਦੌਰਾਨ ਹੁੰਦੀ ਹੈ। ਇਸ ਵਿੱਚ ਐਪੀਥੈਲਿਅਲ ਸੈੱਲਾਂ ਦਾ ਮੇਸੇਨਚਾਈਮਲ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਪਰਿਵਰਤਨ ਸ਼ਾਮਲ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਜਿਸਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਸੈੱਲ ਰੂਪ ਵਿਗਿਆਨ, ਗਤੀਸ਼ੀਲਤਾ, ਹਮਲਾਵਰਤਾ, ਆਦਿ ਵਿੱਚ ਬਦਲਾਅ ਆਉਂਦੇ ਹਨ। (ਵੂ ਐਟ ਅਲ., 2020)। ZEB1 ਕਈ ਐਪੀਥੈਲਿਅਲ ਮਾਰਕਰਾਂ ਨੂੰ ਰੋਕਦਾ ਹੈ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ E-ਕੈਡਰਿਨ ਅਤੇ ਓਕਲੂਡਿਨ, ਜੋ ਕਿ TNBC (ਮੋਰੇਨੋ-ਬੁਏਨੋ ਐਟ ਅਲ., 2008) ਵਿੱਚ ਐਪੀਥੈਲਿਅਲ ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਸੈੱਲ-ਸੈੱਲ ਅਡੈਸ਼ਨ ਅਤੇ ਪੋਲਰਿਟੀ ਨੂੰ ਬਣਾਈ ਰੱਖਣ ਲਈ ਜ਼ਿੰਮੇਵਾਰ ਹਨ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ZEB1 ਕੁਝ ਮਾਰਕਰਾਂ ਜਿਵੇਂ ਕਿ N-ਕੈਡਰਿਨ, ਵਿਮੈਂਟਿਨ ਅਤੇ ਫਾਈਬਰੋਨੇਕਟਿਨ (ਕੋਨਰਾਡੀ ਐਟ ਅਲ., 2014) ਨੂੰ ਸਰਗਰਮ ਕਰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਸਾਈਟੋਸਕੇਲੇਟਲ ਰੀਮਾਡਲਿੰਗ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਜੀਨਾਂ ਨੂੰ ਵੀ ਨਿਯੰਤ੍ਰਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ ਜਿਵੇਂ ਕਿ Rho GTPases ਅਤੇ ਮੈਟ੍ਰਿਕਸ ਮੈਟਾਲੋਪ੍ਰੋਟੀਨੇਸ (MMPs) (ਹੁਆਂਗ)। et al., 2014). 2022), ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਇਹ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਮਾਰਗਾਂ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਟ੍ਰਾਂਸਫਾਰਮਿੰਗ ਗ੍ਰੋਥ ਫੈਕਟਰ-β (TGF-β), Wnt ਸਿਗਨਲਿੰਗ, ਆਦਿ ਨੂੰ ਵੀ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਨਾਲ TNBC ਵਿੱਚ ਟਿਊਮਰ ਦੇ ਹਮਲੇ ਅਤੇ ਮੈਟਾਸਟੈਸਿਸ ਨੂੰ ਉਤਸ਼ਾਹਿਤ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ (ਚੇਨ et al., 2016)। ਬਹੁਤ ਸਾਰੇ ਅਧਿਐਨ ਅਤੇ ਵਿਗਿਆਨਕ ਸਬੂਤ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ ਕਿ ZEB1 ਵਿੱਚ TNBC ਦੀ ਖੋਜ ਅਤੇ ਇਲਾਜ ਦਖਲਅੰਦਾਜ਼ੀ ਲਈ ਇੱਕ ਕੀਮਤੀ ਏਜੰਟ ਦੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਬਹੁਤ ਸੰਭਾਵਨਾ ਹੈ। ਇੱਕ ਤਾਜ਼ਾ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ, ਵਾਰਯਾਹ ਅਤੇ ਹੋਰਾਂ ਨੇ ਇੱਕ TNBC ਮਾਡਲ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਅਤੇ dCas9 ਦੁਆਰਾ ZEB1 ਦਾ ਪੂਰਾ ਦਮਨ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤਾ। ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ, ਉਨ੍ਹਾਂ ਨੇ ਇਨ ਵਿਵੋ ਸਥਿਤੀਆਂ ਵਿੱਚ ZEB1 ਦੀ ਬਹੁਤ ਉੱਚ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਅਤੇ ਲਗਭਗ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਰੋਕ ਦੇਖੀ (ਵਾਰਯਾਹ ਅਤੇ ਹੋਰਾਂ, 2023)।
CRISPR/Cas12 ਇੱਕ ਜੀਨ ਸੰਪਾਦਨ ਟੂਲ ਹੈ ਜਿਸਨੂੰ CRISPR/Cpf1 ਕਿਹਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਇਹ CRISPR/Cas ਸਿਸਟਮ ਤੋਂ ਲਿਆ ਗਿਆ ਹੈ, ਜਿੱਥੇ Cas12 ਸ਼ਬਦ CRISPR-ਸਬੰਧਤ ਪ੍ਰੋਟੀਨ 12 (ਭਾਰਤਕੁਮਾਰ ਐਟ ਅਲ., 2022) ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ Cas9 ਦੇ ਸਮਾਨ ਹੈ। ਸਿਰਫ ਫਰਕ ਇਹ ਹੈ ਕਿ ਇਸ ਵਿੱਚ Cas12 ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਹੁੰਦਾ ਹੈ। Cas9 ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ, Cas12 ਦੇ ਕੁਝ ਵਿਲੱਖਣ ਕਾਰਜ ਹਨ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਜੀਨ ਸੰਪਾਦਨ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਦੌਰਾਨ ਸਟਿੱਕੀ ਸਿਰੇ ਪੈਦਾ ਕਰਨਾ, ਜਦੋਂ ਕਿ Cas9 ਬਲੰਟ ਐਂਡ ਤਿਆਰ ਕਰਦਾ ਹੈ (ਵੈਂਗ ਐਟ ਅਲ., 2021)। Cas12 ਦੀ ਇਹ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਇਸਦੀ ਖਾਸ DNA ਹੇਰਾਫੇਰੀ ਤਕਨਾਲੋਜੀ ਵਿੱਚ ਯੋਗਦਾਨ ਪਾਉਂਦੀ ਹੈ। ਇੱਕ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਜੋ ਟੀਚੇ ਦੇ DNA ਨੂੰ ਸਹੀ ਢੰਗ ਨਾਲ ਪਛਾਣਨ ਅਤੇ ਕੱਟਣ ਦੇ ਸਮਰੱਥ ਹੈ, ਇਸ ਵਿੱਚ ਅਸਾਧਾਰਨ ਬਹੁਪੱਖੀਤਾ ਹੈ, ਜੋ ਇਸਨੂੰ ਜੀਨ ਸੰਪਾਦਨ (Pickar-Oliver and Gersbach, 2019) ਸਮੇਤ ਕਈ ਤਰ੍ਹਾਂ ਦੀਆਂ ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨਾਂ ਲਈ ਇੱਕ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ਔਜ਼ਾਰ ਬਣਾਉਂਦੀ ਹੈ।
ਹੋਰ CRISPR ਰੂਪਾਂ ਵਾਂਗ, CRISPR/Cas12 ਵੀ TNBC ਵਿੱਚ ਜੀਨਾਂ ਨੂੰ ਬਾਹਰ ਕੱਢਣ ਜਾਂ ਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਕਰਨ ਦੇ ਸਮਰੱਥ ਹੈ, ਉਹਨਾਂ ਜੀਨਾਂ ਨੂੰ ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ ਜੋ ਇਸਦੇ ਰੋਗਜਨਨ ਜਾਂ ਇਲਾਜ ਪ੍ਰਤੀ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਵਿੱਚ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਭੂਮਿਕਾ ਨਿਭਾਉਂਦੇ ਹਨ (ਯਾਂਗ ਅਤੇ ਝਾਂਗ, 2023)। ਇਸ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਨੂੰ ਪੂਰਾ ਕਰਨ ਲਈ, ਇੱਕ ਗਾਈਡ RNA (gRNA) ਵਿਕਸਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਜੋ Cas12 ਨੂੰ ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਜੀਨ ਵੱਲ ਨਿਰਦੇਸ਼ਤ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਇੱਕ ਵਾਰ ਜਦੋਂ Cas12 ਆਪਣੇ ਨਿਸ਼ਾਨੇ ਨਾਲ ਜੁੜ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਇਹ DNA ਵਿੱਚ ਡਬਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਬ੍ਰੇਕ ਪੇਸ਼ ਕਰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ DNA ਮੁਰੰਮਤ ਵਿਧੀਆਂ ਨੂੰ ਸਰਗਰਮ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਮੁਰੰਮਤ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਦੌਰਾਨ, ਗਲਤ ਨਿਊਕਲੀਓਟਾਈਡ ਸ਼ਾਮਲ ਕੀਤੇ ਜਾ ਸਕਦੇ ਹਨ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਜੀਨ ਪਰਿਵਰਤਨ ਅਤੇ ਕਾਰਜਸ਼ੀਲਤਾ ਦਾ ਨੁਕਸਾਨ ਹੁੰਦਾ ਹੈ (Zhang et al., 2021a)। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, Cas12 ਐਂਜ਼ਾਈਮ (dCas12 ਕਹਿੰਦੇ ਹਨ) ਦਾ ਇੱਕ ਸੁਧਰਿਆ ਸੰਸਕਰਣ ਵੀ ਜੀਨਾਂ ਨੂੰ ਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਕਰਨ ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਇਸਨੂੰ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ ਐਕਟੀਵੇਟਰ ਨਾਲ ਜੋੜ ਕੇ, ਕੁਝ ਜੀਨਾਂ ਨੂੰ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਰਨਾ ਸੰਭਵ ਹੈ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਉਹਨਾਂ ਨੂੰ ਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਤਕਨਾਲੋਜੀ ਵਿੱਚ ਟਿਊਮਰ ਨੂੰ ਦਬਾਉਣ ਵਾਲੇ ਜੀਨਾਂ ਦੀ ਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲਤਾ ਨੂੰ ਉਤਸ਼ਾਹਿਤ ਕਰਨ ਵਿੱਚ ਬਹੁਤ ਸੰਭਾਵਨਾ ਹੈ (ਸੁਲਤਾਨ et al., 2022)।
ਪ੍ਰਾਈਮ ਐਡੀਟਿੰਗ ਇੱਕ ਨਵੀਂ ਵਿਕਸਤ ਅਤੇ ਬਹੁਤ ਹੀ ਉੱਤਮ ਜੀਨੋਮ ਐਡੀਟਿੰਗ ਤਕਨਾਲੋਜੀ ਹੈ। ਇਹ ਕਿਸੇ ਜੀਵ ਦੇ ਡੀਐਨਏ ਨੂੰ ਬਹੁਤ ਹੀ ਸਹੀ ਢੰਗ ਨਾਲ ਸੋਧਣ ਦੇ ਸਮਰੱਥ ਹੈ (ਚੇਨ ਅਤੇ ਲਿਊ, 2023)। ਪ੍ਰਾਈਮ ਐਡੀਟਿੰਗ ਦੋ ਮੁੱਖ ਹਿੱਸਿਆਂ ਦੇ ਏਕੀਕਰਨ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ: ਇੱਕ ਸੋਧਿਆ ਹੋਇਆ CRISPR/Cas9 ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਅਤੇ ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟੇਸ। CRISPR/Cas9 ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਦੀ ਭੂਮਿਕਾ ਜੀਨੋਮ ਵਿੱਚ ਸਹੀ ਸਾਈਟਾਂ ਨੂੰ ਚੋਣਵੇਂ ਤੌਰ 'ਤੇ ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਬਣਾਉਣਾ ਹੈ, ਜਦੋਂ ਕਿ ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟੇਸ ਟੀਚੇ ਦੇ ਸਥਾਨ 'ਤੇ ਡੀਐਨਏ ਨੂੰ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਸੋਧਣ ਵਿੱਚ ਮਦਦ ਕਰਦਾ ਹੈ (ਹਸਨ ਐਟ ਅਲ., 2021)। ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਐਡੀਟਿੰਗ ਵਿਧੀ ਵਿੱਚ, ਪਹਿਲੇ ਕਦਮ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਐਡੀਟਿੰਗ ਗਾਈਡ RNA (pegRNA) (ਸਟੈਂਡੇਜ-ਬੀਅਰ ਐਟ ਅਲ., 2021) ਬਣਾਉਣਾ ਸ਼ਾਮਲ ਹੈ। ਇਸ ਵਿੱਚ ਟਾਰਗੇਟ DNA ਵਿੱਚ ਲੋੜੀਂਦੀ ਐਡੀਟਿੰਗ ਸਾਈਟ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰੀ ਟਾਰਗੇਟ ਕ੍ਰਮ ਅਤੇ RNA ਟੈਂਪਲੇਟ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ। ਫਿਰ pegRNA ਨੂੰ ਇੱਕ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਐਡੀਟਿੰਗ ਨਿਊਕਲੀਜ਼ (PE2) ਦੇ ਨਾਲ ਟਾਰਗੇਟ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਪੇਸ਼ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। PE2 ਇੱਕ ਫਿਊਜ਼ਨ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਹੈ ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਇੱਕ Cas9 ਐਂਜ਼ਾਈਮ, ਇੱਕ ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟੇਸ, ਅਤੇ ਇੱਕ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਐਡੀਟਿੰਗ ਅਡੈਪਟਰ (ਮਾਰਟਿਨ-ਅਲੋਨਸੋ ਐਟ ਅਲ., 2021) ਹੁੰਦਾ ਹੈ। ਸੈੱਲ ਦੇ ਅੰਦਰ, pegRNA ਅਤੇ PE2 ਕੰਪਲੈਕਸ ਉਸ ਖਾਸ DNA ਦੀ ਖੋਜ ਕਰਦੇ ਹਨ ਜਿਸ ਨੂੰ ਉਹ ਸੋਧਣਾ ਚਾਹੁੰਦੇ ਹਨ। Cas9 ਐਨਜ਼ਾਈਮ DNA ਨੂੰ ਕੱਟਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਸਿੰਗਲ ਸਟ੍ਰੈਂਡਾਂ ਵਾਲਾ ਇੱਕ ਟੈਂਪਲੇਟ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ (Choi et al., 2022)। ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟੇਸ ਇਸ ਟੈਂਪਲੇਟ ਦੀ ਵਰਤੋਂ DNA ਨੂੰ ਸੰਪਾਦਨ ਲਈ ਤਿਆਰ ਕਰਨ ਲਈ ਕਰਦਾ ਹੈ। DNA ਦੀ ਨਕਲ ਕਰਨ ਦੇ ਨਾਲ, RNA ਟੈਂਪਲੇਟ ਨੂੰ ਸੰਪਾਦਿਤ ਕਰਨ ਲਈ ਨਿਰਦੇਸ਼ ਵੀ ਸ਼ਾਮਲ ਕੀਤੇ ਗਏ ਹਨ। ਅੰਤ ਵਿੱਚ, ਨਵੇਂ ਬਣਾਏ DNA ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਨੂੰ DNA ਵਿੱਚ ਬ੍ਰੇਕ ਦੀ ਮੁਰੰਮਤ ਕਰਨ ਲਈ ਇੱਕ ਟੈਂਪਲੇਟ ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਜਿਸਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਇੱਕ ਬਦਲਿਆ ਹੋਇਆ DNA ਕ੍ਰਮ ਹੁੰਦਾ ਹੈ ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਲੋੜੀਂਦਾ ਸੋਧ ਹੁੰਦਾ ਹੈ (Ochoa-Sanchez et al., 2021)। ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਐਡੀਟਿੰਗ ਵਿਧੀ ਜੀਨਾਂ ਵਿੱਚ ਵਿਆਪਕ ਪਰਿਵਰਤਨ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣ ਸਕਦੀ ਹੈ। ਇਹ ਬਿੰਦੂ ਪਰਿਵਰਤਨ, ਸੰਮਿਲਨ, ਮਿਟਾਉਣ, ਅਤੇ ਇੱਥੋਂ ਤੱਕ ਕਿ ਜੀਨ ਬਦਲਣ ਨੂੰ ਵੀ ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਬਣਾ ਸਕਦੀ ਹੈ (Anzalone et al., 2019; Chen and Liu, 2023)। ਪ੍ਰਾਈਮ ਐਡੀਟਿੰਗ ਪਿਛਲੀਆਂ ਜੀਨੋਮ ਐਡੀਟਿੰਗ ਤਕਨਾਲੋਜੀਆਂ ਨਾਲੋਂ ਕਈ ਫਾਇਦੇ ਪੇਸ਼ ਕਰਦੀ ਹੈ। ਇਹਨਾਂ ਵਿੱਚ ਵਧੀ ਹੋਈ ਸ਼ੁੱਧਤਾ, ਘਟੇ ਹੋਏ ਆਫ-ਟਾਰਗੇਟ ਪ੍ਰਭਾਵ, ਅਤੇ DNA ਡਬਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਬ੍ਰੇਕਾਂ 'ਤੇ ਨਿਰਭਰ ਕੀਤੇ ਬਿਨਾਂ DNA ਨੂੰ ਸੰਪਾਦਿਤ ਕਰਨ ਦੀ ਯੋਗਤਾ ਸ਼ਾਮਲ ਹੈ (Anzalone et al., 2020)।
CRISPR/Cas9 ਤਕਨਾਲੋਜੀ ਅਸਲ ਵਿੱਚ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਨੂੰ ਪਲਾਜ਼ਮਿਡ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਅਤੇ ਫੇਜ ਇਨਫੈਕਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਚਾਉਣ ਲਈ ਵਿਕਸਤ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ ਅਤੇ ਬਾਅਦ ਵਿੱਚ ਇਸਨੂੰ ਜੀਨੋਮ ਐਡੀਟਿੰਗ ਲਈ ਇੱਕ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ RNA-ਅਧਾਰਤ DNA ਟਾਰਗੇਟਿੰਗ ਟੂਲ ਵਜੋਂ ਦੁਬਾਰਾ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਸੀ (ਜਿਆਂਗ ਅਤੇ ਡੌਡਨਾ, 2017)। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, CRISPR/Cas9 ਸਿਸਟਮ ਨੂੰ ਕ੍ਰਮਵਾਰ 50% ਅਤੇ 87% ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਅਤੇ ਆਰਕੀਅਲ ਜੀਨੋਮ ਵਿੱਚ ਮੌਜੂਦ ਦੱਸਿਆ ਗਿਆ ਹੈ (ਇਸ਼ਿਨੋ ਐਟ ਅਲ., 2018)। CRISPR/Cas9 ਇਨ ਵਿਵੋ ਅਤੇ ਇਨ ਵਿਟਰੋ ਮੋਡਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕਿਸੇ ਵੀ ਅਸਧਾਰਨ ਜੈਨੇਟਿਕ ਕ੍ਰਮ ਨੂੰ ਮਿਟਾਉਣ, ਸੰਮਿਲਿਤ ਕਰਨ ਅਤੇ ਸੁਧਾਰ ਕਰਨ ਲਈ ਇੱਕ ਸੰਭਾਵੀ ਸਾਧਨ ਹੈ (ਸਬਿਤ ਐਟ ਅਲ., 2021)। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, CRISPR/Cas9 ਨੂੰ ਦਿਲਚਸਪੀ ਦੇ ਟਾਰਗੇਟ ਜੀਨਾਂ ਲਈ ਇਸਦੀ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਦੇ ਕਾਰਨ ਅਨੁਕੂਲ ਇਮਿਊਨ ਸਿਸਟਮ ਦਾ ਹਿੱਸਾ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ (ਚੇਨ ਅਤੇ ਝਾਂਗ, 2018)।
CRISPR/Cas9 ਵਿੱਚ Cas9 ਅਤੇ ਇੱਕ ਸਿੰਗਲ ਗਾਈਡ RNA (sgRNA) ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ। Cas9 ਇੱਕ ਐਂਡੋਨਿਊਕਲੀਜ਼ ਹੈ ਜੋ ਕਈ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਹਿੱਸਿਆਂ ਤੋਂ ਬਣਿਆ ਹੈ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, Cas9 ਵਿੱਚ ਵਿਲੱਖਣ ਢਾਂਚਾਗਤ ਅਤੇ ਸੰਰਚਨਾਤਮਕ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾਵਾਂ ਹਨ (ਪੇਸੇਸਾ ਐਟ ਅਲ., 2022) ਕਿਉਂਕਿ ਇਸ ਵਿੱਚ ਦੋ ਲੋਬ ਹਨ: ਮਾਨਤਾ (REC) ਅਤੇ ਨਿਊਕਲੀਜ਼ (NUC)। REC ਲੋਬ ਨੂੰ ਅੱਗੇ ਤਿੰਨ ਖੇਤਰਾਂ ਵਿੱਚ ਵੰਡਿਆ ਗਿਆ ਹੈ: REC1, REC2, ਅਤੇ ਬ੍ਰਿਜ ਹੈਲੀਸ (ਕਰੋਮਵੈੱਲ ਐਟ ਅਲ., 2018)। NUC ਵਿੱਚ ਤਿੰਨ ਲੋਬ ਹੁੰਦੇ ਹਨ, ਅਰਥਾਤ RuvC (RuvC I, RuvC II, RuvC III), HNH ਅਤੇ ਪ੍ਰੋਟੋਸਪੇਸਕਰ ਨਾਲ ਲੱਗਦੇ ਮੋਟਿਫ (PAM) ਇੰਟਰਐਕਸ਼ਨ ਡੋਮੇਨ (ਚਿੱਤਰ 1) (ਸੌਂਗ ਐਟ ਅਲ., 2016)। sgRNA ਵਿੱਚ ਦੋ ਭਾਗ ਹੁੰਦੇ ਹਨ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ CRISPR RNA (crRNA) ਅਤੇ ਟ੍ਰਾਂਸਕੋਡਿੰਗ ਛੋਟਾ RNA (ਟ੍ਰੇਸਰ RNA) (ਚਿੱਤਰ 1) ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ। sgRNA ਇੱਕ ਸਰਗਰਮ ਕੰਪਲੈਕਸ ਬਣਾਉਣ ਲਈ Cas9 ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਨੂੰ ਕਨੈਕਸਿਨ ਨਾਲ ਜੋੜਦਾ ਹੈ, ਜਿਸਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਕ ਕੰਪਲੈਕਸ ਵੀ ਕਿਹਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ (ਰਿਕਟਰ ਐਟ ਅਲ., 2012)। crRNA ਇੱਕ 18-20 ਨਿਊਕਲੀਓਟਾਈਡ ਬੇਸ ਜੋੜਾ ਹੈ ਜੋ ਨਿਸ਼ਾਨਾ DNA ਕ੍ਰਮਾਂ ਨੂੰ ਪਛਾਣਨ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਭੂਮਿਕਾ ਨਿਭਾਉਂਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, crRNA ਨਿਸ਼ਾਨਾ DNA ਨਾਲ ਜੋੜਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ tracrRNA ਨਿਸ਼ਾਨਾ DNA ਨੂੰ ਬੰਨ੍ਹਣ ਲਈ Cas9 ਨਿਊਕਲੀਓਜ਼ ਲਈ ਇੱਕ ਸਕੈਫੋਲਡ ਵਜੋਂ ਕੰਮ ਕਰਦਾ ਹੈ (ਮੰਗਵਾਰ ਐਟ ਅਲ., 2019)। ਦੂਜੇ ਪਾਸੇ, PAM ਕ੍ਰਮ ਵਿੱਚ 3 ਨਿਊਕਲੀਓਟਾਈਡ ਹਨ, ਜੋ ਪ੍ਰਭਾਵਕ ਕੰਪਲੈਕਸ ਦੇ DNA ਨਾਲ ਬੰਧਨ ਦੀ ਪੁਸ਼ਟੀ ਕਰਦੇ ਹਨ, ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਵਿਚੋਲਗੀ ਕਰਦੇ ਹਨ। Cas9 ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਕੰਪਲੈਕਸ ਸਬਯੂਨਿਟਾਂ RuvC ਅਤੇ HNH ਵਿੱਚ ਉਤਪ੍ਰੇਰਕ ਗਤੀਵਿਧੀ ਹੁੰਦੀ ਹੈ (ਰਿਕਟਰ ਐਟ ਅਲ., 2012; ਅਸਮਾਮਾਵ ਅਤੇ ਜ਼ੌਡੀ, 2021)। Cas9 ਸਬਯੂਨਿਟ ਦਾ HNH ਨਿਊਕਲੀਓਜ਼ ਡੋਮੇਨ crRNA ਨਾਲ ਜੁੜੇ DNA ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਨੂੰ ਤੋੜਦਾ ਹੈ। RuvC ਨਿਊਕਲੀਜ਼ ਡੋਮੇਨ ਹੋਰ DNA ਸਟ੍ਰੈਂਡਾਂ ਨੂੰ ਤੋੜਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਡਬਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਬ੍ਰੇਕ (DSBs) ਪੈਦਾ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਦੋ ਵੱਖ-ਵੱਖ DNA ਬ੍ਰੇਕ ਰਿਪੇਅਰ ਵਿਧੀਆਂ ਸਰਗਰਮ ਹੋ ਜਾਂਦੀਆਂ ਹਨ (ਜਿਆਂਗ ਅਤੇ ਡੌਡਨਾ, 2017) (ਚਿੱਤਰ 1)।
ਚਿੱਤਰ 1. CRISPR/Cas9 (A) ਦਾ ਸੰਖੇਪ। CRISPR/Cas9 ਸਿਸਟਮ ਦੇ ਹਿੱਸੇ: (i). Cas9 ਐਂਡੋਨਿਊਕਲੀਜ਼ ਟਾਰਗੇਟ DNA ਕ੍ਰਮ ਨੂੰ ਕੱਟਣ ਲਈ ਜ਼ਿੰਮੇਵਾਰ ਹੈ, (ii) crRNA ਅਤੇ tra-crRNA chimeras ਦੇ ਫਿਊਜ਼ਨ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਇੱਕ ਸਿੰਗਲ ਗਾਈਡ (sg) RNA। (ਦੋ)। Cas9 ਵਿੱਚ ਕਈ ਹਿੱਸੇ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ ਜਿਵੇਂ ਕਿ Rec I, Rec II, NUC ਲੋਬ (HNH ਅਤੇ Ruv C ਉਪ-ਕੰਪੋਨੈਂਟ ਹਨ) ਅਤੇ PAM ਇੰਟਰਐਕਸ਼ਨ ਡੋਮੇਨ (C) ਸੰਬੰਧਿਤ ਫੰਕਸ਼ਨਾਂ ਦੇ ਨਾਲ। CRISPR/Cas9 ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਕੰਪਲੈਕਸ DNA ਕ੍ਰਮਾਂ ਨੂੰ ਗੈਰ-ਪੂਰਕ ਅਤੇ ਪੂਰਕ ਰੂਪਾਂ (D) ਵਿੱਚ ਵੰਡਦਾ ਹੈ। CRISPR/Cas9 ਜੀਨੋਮ ਨੂੰ ਤਿੰਨ ਪੜਾਵਾਂ ਵਿੱਚ ਸੰਪਾਦਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ: ਪਛਾਣ, ਕੱਟਣਾ ਅਤੇ ਮੁਰੰਮਤ। ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਕੀਤਾ sg-RNA Cas9 ਨੂੰ ਮਾਰਗਦਰਸ਼ਨ ਕਰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਪੂਰਕ ਹਿੱਸੇ crRNA ਦੁਆਰਾ ਲੋੜੀਂਦੇ ਕ੍ਰਮ ਨੂੰ ਪਛਾਣਦਾ ਹੈ। Cas9 5′-NGG-3′ 'ਤੇ PAM ਕ੍ਰਮ ਨੂੰ ਪਛਾਣਦਾ ਹੈ ਅਤੇ DNA ਨੂੰ ਪਿਘਲਾ ਦਿੰਦਾ ਹੈ, ਇੱਕ DNA-RNA ਹਾਈਬ੍ਰਿਡ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਕਲੀਵੇਜ ਨੂੰ ਸਰਗਰਮ ਕਰਦਾ ਹੈ। Cas9 ਦਾ HNH ਡੋਮੇਨ ਪੂਰਕ ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਨੂੰ ਤੋੜਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ RuvC ਡੋਮੇਨ ਗੈਰ-ਪੂਰਕ ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਨੂੰ ਤੋੜਦਾ ਹੈ। CRISPR/Cas9 dsDNA ਨੂੰ ਦੋ ਤਰੀਕਿਆਂ ਨਾਲ ਤੋੜ ਕੇ ਮੁਰੰਮਤ ਕਰਦਾ ਹੈ: ਗੈਰ-ਸਮਰੂਪ ਅੰਤ ਜੋੜ (NHEJ) ਅਤੇ ਸਮਰੂਪ-ਨਿਰਦੇਸ਼ਿਤ ਮੁਰੰਮਤ (HDR)। NHEJ ਇੱਕ ਐਨਜ਼ਾਈਮੈਟਿਕ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਦੁਆਰਾ ਵਿਦੇਸ਼ੀ ਸਮਰੂਪ DNA ਦੀ ਅਣਹੋਂਦ ਵਿੱਚ ਡਬਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡਡ DNA ਦੀ ਮੁਰੰਮਤ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਇੱਕ ਗਲਤੀ-ਪ੍ਰੋਣ ਵਿਧੀ ਜੋ ਬੇਤਰਤੀਬ DNA ਕ੍ਰਮਾਂ ਨੂੰ ਪਾ ਸਕਦੀ ਹੈ ਜਾਂ ਹਟਾ ਸਕਦੀ ਹੈ। HDR ਬਹੁਤ ਖਾਸ ਹੈ ਅਤੇ ਸਮਰੂਪ DNA ਟੈਂਪਲੇਟਾਂ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।
CRISPR/Cas9-ਮਾਧਿਅਮ ਮੁਰੰਮਤ ਮਾਰਗਾਂ ਵਿੱਚ ਗੈਰ-ਸਮਰੂਪ ਅੰਤ ਜੋੜਨ (NHEJ) ਅਤੇ ਸਮਰੂਪ-ਨਿਰਦੇਸ਼ਿਤ ਮੁਰੰਮਤ (HDR) ਵਿਧੀਆਂ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ। NHEJ ਇੱਕ ਗਲਤੀ-ਪ੍ਰੋਨ ਮਾਰਗ ਹੈ ਕਿਉਂਕਿ ਇਸ ਵਿੱਚ ਸੰਮਿਲਨ ਜਾਂ ਮਿਟਾਉਣਾ ਸ਼ਾਮਲ ਹੁੰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਮੁਰੰਮਤ ਵਿਧੀ ਦੌਰਾਨ ਕਿਸੇ ਪੈਟਰਨ ਦੀ ਲੋੜ ਨਹੀਂ ਹੁੰਦੀ ਹੈ। ਇਹ ਮਿਆਰੀ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਤਿਆਰ ਕਰਨ ਲਈ ਬੇਤਰਤੀਬ ਨਿਊਕਲੀਓਟਾਈਡਸ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦਾ ਹੈ (ਅੱਬਾਸੀ ਐਟ ਅਲ., 2021)। ਇਸ ਮੁਰੰਮਤ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਵਿੱਚ ਚਾਰ ਕੰਪਲੈਕਸ ਹੁੰਦੇ ਹਨ ਜਿਵੇਂ ਕਿ KU ਕੰਪਲੈਕਸ, ਕਰਾਸ-ਪੂਰਕ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਕੰਪਲੈਕਸ ਟਾਈਪ 4 (XRCC-4), DNA ਐਂਡ ਪ੍ਰੋਸੈਸਿੰਗ ਐਂਜ਼ਾਈਮ, ਅਤੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਕਿਨੇਜ਼ DNA-PKcs (ਅੱਬਾਸੀ ਐਟ ਅਲ., 2021)। KU ਕੰਪਲੈਕਸ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੇ ਦੋ ਸਬਯੂਨਿਟਾਂ ਹਨ, Ku 70 ਅਤੇ Ku 80, ਅਤੇ ਇਹ NHEJ ਵਿਧੀ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਭੂਮਿਕਾ ਨਿਭਾਉਂਦਾ ਹੈ, ਕਿਉਂਕਿ ਮੁਰੰਮਤ ਵਿਧੀ ਦੋ ਸਬਯੂਨਿਟਾਂ (Ku 70 ਅਤੇ Ku 80) ਨੂੰ ਨਿਸ਼ਾਨਾ DNA (Abbasi et al., 2021) ਦੇ ਧੁੰਦਲੇ ਜਾਂ ਲਗਭਗ ਧੁੰਦਲੇ ਸਿਰਿਆਂ ਨਾਲ ਜੋੜ ਕੇ ਸ਼ੁਰੂ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਜੋ ਸੱਟ ਦੀ ਜਗ੍ਹਾ 'ਤੇ ਹੋਰ NHEJ-ਸਬੰਧਤ ਕਾਰਕਾਂ ਨੂੰ ਭਰਤੀ ਕਰਨ ਲਈ ਇੱਕ ਸਕੈਫੋਲਡ ਵਜੋਂ ਕੰਮ ਕਰਦੀ ਹੈ (Yang et al., 2020)। XRCC-4 ਅਤੇ DNA ligase ਕ੍ਰਮਵਾਰ 334 ਅਤੇ 911 ਅਮੀਨੋ ਐਸਿਡਾਂ ਤੋਂ ਬਣੇ ਹੁੰਦੇ ਹਨ, ਅਤੇ XRCC4-DNA ligase IV ਕੰਪਲੈਕਸ DNA ਸਿਰਿਆਂ ਦੇ ਬੰਧਨ ਨੂੰ ਉਤੇਜਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ (ਚੈਟਰਜ et al., 2015)। DNA ਐਂਡ ਪ੍ਰੋਸੈਸਿੰਗ ਐਂਜ਼ਾਈਮ, ਜਿਸਨੂੰ ਪੌਲੀਨਿਊਕਲੀਓਟਾਈਡ ਕਿਨੇਜ਼ 3′-ਫਾਸਫੇਟ ਵੀ ਕਿਹਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਇੱਕ DNA ਐਂਡ ਪ੍ਰੋਸੈਸਿੰਗ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਹੈ। ਇਹ DNA ਵਿੱਚ 3′P ਸਮੂਹ ਨੂੰ ਹਟਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਅਤੇ DSB ਮੁਰੰਮਤ ਦੌਰਾਨ 5′OH ਸਮੂਹ ਨੂੰ ਫਾਸਫੋਰੀਲੇਟ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਵਿੱਚ SSB ਮੁਰੰਮਤ ਮਾਰਗ (ਚੈਟਰਜ et al., 2015) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਸਿੰਗਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਬ੍ਰੇਕਸ (SSBs) ਦੀ ਮੁਰੰਮਤ ਵੀ ਸ਼ਾਮਲ ਹੈ। ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਕਿਨੇਜ਼ DNA-PKcs ਇੱਕ DNA-ਨਿਰਭਰ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਕਿਨੇਜ਼ ਹੈ ਜਿਸ ਵਿੱਚ PIKKs (ਫਾਸਫੇਟਿਡਾਈਲਿਨੋਸਿਟੋਲ 3-ਕਿਨੇਜ਼-ਸੰਬੰਧੀ ਕਿਨੇਜ਼) ਅਤੇ ਐਟੈਕਸੀਆ ਟੈਲੈਂਜੈਕਟੇਸੀਆ ਮਿਊਟੇਟਿਡ (ATM) ਪਰਿਵਾਰ ਦੇ ਨਾਲ-ਨਾਲ ATM ਅਤੇ Rad3-ਸੰਬੰਧੀ ATRs ਦਾ ਇੱਕ ਉਤਪ੍ਰੇਰਕ ਸਬਯੂਨਿਟ ਸ਼ਾਮਲ ਹੁੰਦਾ ਹੈ। ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਬ੍ਰੇਕਸ (DSBs) ਅਤੇ ਸਿੰਗਲ-ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਬ੍ਰੇਕਸ (Yue et al., 2020; Peng et al., 2016)।
HDR ਇੱਕ ਵਧੇਰੇ ਸਟੀਕ ਅਤੇ ਢੁਕਵੀਂ ਮੁਰੰਮਤ ਵਿਧੀ ਹੈ ਕਿਉਂਕਿ ਜਾਣਕਾਰੀ ਨੂੰ ਸਮਰੂਪ DNA ਡੁਪਲੈਕਸ ਦੇ ਅਟੁੱਟ ਰੂਪ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕਾਪੀ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਹਾਲਾਂਕਿ ਇਸ ਲਈ ਭੈਣ ਕ੍ਰੋਮੈਟਿਡਸ ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ। ਇਹ ਥਣਧਾਰੀ ਸੈੱਲ ਚੱਕਰ ਦੇ S/G2 ਪੜਾਅ ਦੌਰਾਨ ਹੁੰਦਾ ਹੈ। HDR ਮੁੱਖ ਤੌਰ 'ਤੇ ਖਮੀਰ ਪ੍ਰਜਾਤੀਆਂ ਵਿੱਚ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਪਰ NHEJ ਥਣਧਾਰੀ ਜੀਵਾਂ ਵਿੱਚ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹੈ (ਬਰਮਾ ਐਟ ਅਲ., 2006; ਅੱਬਾਸੀ ਐਟ ਅਲ., 2021)। ਸੰਪੂਰਨ ਮੁਰੰਮਤ ਵਿਧੀ ਚਿੱਤਰ 1 ਵਿੱਚ ਦਿਖਾਈ ਗਈ ਹੈ।
ਕਿਉਂਕਿ TNBC ਜੈਨੇਟਿਕ ਅਤੇ ਐਪੀਜੀਨੇਟਿਕ ਅਸਧਾਰਨਤਾਵਾਂ ਕਾਰਨ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, CRISPR/Cas9 ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਘਾਤਕ ਜੀਨੋਮਿਕ/ਐਪੀਜੀਨੋਮਿਕ ਅਸਧਾਰਨਤਾਵਾਂ ਦਾ ਸੁਧਾਰ ਇੱਕ ਵਾਜਬ ਇਲਾਜ ਪਹੁੰਚ ਹੋ ਸਕਦੀ ਹੈ (ਚੇਨ ਐਟ ਅਲ., 2019)। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਸੈੱਲ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨਲ ਰੈਗੂਲੇਸ਼ਨ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਕੁਝ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨਲ ਕਾਰਕ ਕੈਂਸਰ ਸੈੱਲਾਂ ਦੀਆਂ ਵਿਲੱਖਣ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾਵਾਂ ਨੂੰ ਪ੍ਰਦਰਸ਼ਿਤ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਨ, ਜੋ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦੇ ਹਨ ਕਿ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨਲ ਰੈਗੂਲੇਸ਼ਨ ਕੈਂਸਰ ਦੇ ਇਲਾਜ ਲਈ ਇੱਕ ਸ਼ਾਨਦਾਰ ਪਹੁੰਚ ਹੋ ਸਕਦੀ ਹੈ (ਡ੍ਰੋਸਟ ਐਟ ਅਲ., 2017)। ਡਰੱਗ ਵਿਕਾਸ ਲਈ ਟਿਊਮਰ ਦੀਆਂ ਇਹਨਾਂ ਅਣੂ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾਵਾਂ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਜੈਨੇਟਿਕ, ਐਪੀਜੀਨੇਟਿਕ ਅਤੇ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨਲ ਨੁਕਸ, ਦੀ ਖੋਜ ਕਰਨ ਨਾਲ ਕਲੀਨਿਕਲ ਨਤੀਜਿਆਂ ਵਿੱਚ ਸੁਧਾਰ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਸਕ੍ਰੀਨਿੰਗ ਲਾਗਤਾਂ ਨੂੰ ਘਟਾ ਸਕਦਾ ਹੈ। CRISPR ਇੱਕ ਸੰਭਾਵੀ ਜੀਨ ਸੰਪਾਦਨ ਟੂਲ ਹੈ ਜੋ ਨਾ ਸਿਰਫ਼ ਕੈਂਸਰ ਪੈਦਾ ਕਰਨ ਵਾਲੇ ਜੀਨੋਮਿਕ ਟੀਚਿਆਂ ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਪਛਾਣ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਸਗੋਂ ਮਨੁੱਖੀ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਓਨਕੋਜੀਨਾਂ ਨੂੰ ਸੰਪਾਦਿਤ ਕਰਨ, ਦਬਾਉਣ ਅਤੇ ਐਪੀਜੀਨੇਟਿਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸੋਧਣ ਲਈ ਵੀ ਵਰਤਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ (ਸਾਰਣੀ 1) (ਅਹਿਮਦ ਐਟ ਅਲ., 2021)। ਟਿਊਮਰ ਨੂੰ ਦਬਾਉਣ ਵਾਲੇ, ਓਨਕੋਜੀਨ ਅਤੇ ਡਰੱਗ ਪ੍ਰਤੀਰੋਧ ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਜੀਨਾਂ ਦੀ ਖੋਜ ਕਰਨ ਲਈ ਕਈ CRISPR ਸਕ੍ਰੀਨਾਂ ਕੀਤੀਆਂ ਗਈਆਂ ਹਨ। ਵੱਖ-ਵੱਖ TNBC ਓਨਕੋਜੀਨਾਂ ਨੂੰ ਸੰਪਾਦਿਤ ਕਰਨ ਲਈ CRISPR/Cas9 ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਚਿੱਤਰ 2 ਵਿੱਚ ਦਿਖਾਈ ਗਈ ਹੈ।
ਚਿੱਤਰ 2. CRISPR/Cas9 ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਵੱਖ-ਵੱਖ TNBC ਓਨਕੋਜੀਨਾਂ ਦਾ ਜੀਨ ਸੰਪਾਦਨ ਜਿਸਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਟਿਊਮਰ ਦਾ ਵਾਧਾ ਅਤੇ ਮੈਟਾਸਟੈਸਿਸ ਘੱਟ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਇਹਨਾਂ ਓਨਕੋਜੀਨਾਂ ਵਿੱਚ CDK7, NAT1, UBR5, YTHDF2, ITGA9, CXCR4 ਅਤੇ CXCR7, Crypto1, ROR1 ਅਤੇ ST8SIA ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ, ਜੋ TNBC ਦੇ ਵਾਪਰਨ ਅਤੇ ਮੈਟਾਸਟੈਸਿਸ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ।
ਕੈਂਸਰ ਸੈੱਲ ਮਾਈਗ੍ਰੇਸ਼ਨ, ਇਨਵੈਸ਼ਨ, ਅਤੇ ਐਪੀਥੀਲੀਅਲ-ਮੇਸੇਨਚਾਈਮਲ ਟ੍ਰਾਂਜਿਸ਼ਨ (EMT) ITGA9 ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਹੋਏ ਹਨ। ਪਿਛਲੇ ਅਧਿਐਨਾਂ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਹੈ ਕਿ ITGA9 ਨੌਚ ਮਾਰਗ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਮੁੱਖ ਖਿਡਾਰੀ ਹੈ ਅਤੇ ਰੈਬਡੋਮਿਓਸਾਰਕੋਮਾ ਮੈਟਾਸਟੈਸਿਸ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਦਿਲਚਸਪ ਭੂਮਿਕਾ ਨਿਭਾਉਂਦਾ ਹੈ (ਮੋਲਿਸਟ ਐਟ ਅਲ., 2020)। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ITGA9 ਨੂੰ ਛਾਤੀ ਦੇ ਕੈਂਸਰ (ਵੈਂਗ ਜ਼ੈਡ. ਐਟ ਅਲ., 2019) ਸਮੇਤ ਕਈ ਟਿਊਮਰ ਕਿਸਮਾਂ ਵਿੱਚ ਮਰੀਜ਼ ਦੇ ਪੂਰਵ-ਅਨੁਮਾਨ ਨਾਲ ਨੇੜਿਓਂ ਜੁੜਿਆ ਹੋਇਆ ਪਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ITGA9 ਦੇ ਬਾਇਓਇਨਫਾਰਮੈਟਿਕਸ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ TNBC ਵਿੱਚ ਇਸਦਾ ਪ੍ਰਗਟਾਵਾ ਛਾਤੀ ਦੇ ਕੈਂਸਰ ਦੇ ਹੋਰ ਉਪ-ਕਿਸਮਾਂ ਨਾਲੋਂ ਕਾਫ਼ੀ ਜ਼ਿਆਦਾ ਸੀ। TNBC ਮਰੀਜ਼ਾਂ ਵਿੱਚ ITGA9 ਦੇ ਉੱਚੇ ਪੱਧਰ ਟਿਊਮਰ ਮੈਟਾਸਟੈਸਿਸ ਅਤੇ ਦੁਬਾਰਾ ਹੋਣ ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਹੋਏ ਹਨ। CRISPR/Cas9 ਦੁਆਰਾ ITGA9 ਦੇ ਨਾਕਆਊਟ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਕੈਂਸਰ ਸਟੈਮ ਸੈੱਲ (CSC)-ਵਰਗੀਆਂ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾਵਾਂ, ਟਿਊਮਰ ਐਂਜੀਓਜੇਨੇਸਿਸ, ਟਿਊਮਰ ਵਾਧਾ, ਅਤੇ TNBC ਵਿੱਚ β-ਕੈਟੇਨਿਨ ਡਿਗਰੇਡੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਉਤਸ਼ਾਹਿਤ ਕਰਕੇ ਮੈਟਾਸਟੈਸਿਸ ਵਿੱਚ ਕਮੀ ਆਈ (ਵੈਂਗ ਜ਼ੈਡ. ਐਟ ਅਲ., 2019)।
ਕ੍ਰਿਪਟੋ-1 TGF-β ਪਰਿਵਾਰ ਦਾ ਇੱਕ ਮੈਂਬਰ ਹੈ ਅਤੇ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਭਰੂਣ ਉਤਪਤੀ, ਸਟੈਮ ਸੈੱਲ ਰੱਖ-ਰਖਾਅ, ਅਤੇ ਕੈਂਸਰ ਮੈਟਾਸਟੈਸਿਸ ਲਈ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹੈ (Ishii et al., 2021)। Tdgf-1 ਵਜੋਂ ਵੀ ਜਾਣਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਇਹ ਇੱਕ ਓਨਕੋਜੇਨਿਕ GPI-ਐਂਕਰਡ ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਹੈ ਜੋ ਪ੍ਰਾਈਮਿਟਿਵ ਸਟ੍ਰੀਕ, ਮੇਸੋਡਰਮ ਅਤੇ ਐਂਡੋਡਰਮ ਦੇ ਗਠਨ ਦੇ ਨਿਯਮਨ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਹੈ, ਨਾਲ ਹੀ ਭਰੂਣ ਉਤਪਤੀ ਦੌਰਾਨ ਸਰੀਰ ਦੇ ਅੰਗਾਂ ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਵਿੱਚ ਖੱਬੇ/ਸੱਜੇ ਅਸਮਿਤਤਾ ਦੀ ਸਥਾਪਨਾ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਹੈ (Zhang et al., 2021b)। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਕ੍ਰਿਪਟੋ-1 ਨੂੰ ਸਟੈਮ ਸੈੱਲ ਮਾਰਕਰ (Zhang et al., 2021b) ਦੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਐਪੀਥੀਲੀਅਲ-ਮੇਸੇਨਚਾਈਮਲ ਟ੍ਰਾਂਜਿਸ਼ਨ (EMT) ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ। EMT ਨਾ ਸਿਰਫ਼ ਭਰੂਣ ਵਿਕਾਸ, ਫਾਈਬਰੋਸਿਸ ਅਤੇ ਜ਼ਖ਼ਮ ਭਰਨ ਵਰਗੀਆਂ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆਵਾਂ ਲਈ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹੈ, ਸਗੋਂ ਕੈਂਸਰ ਦੇ ਹਮਲੇ ਅਤੇ ਮੈਟਾਸਟੈਸਿਸ ਲਈ ਵੀ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹੈ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਕ੍ਰਿਪਟੋ-1 ਨੂੰ ਚਾਰ ਨੌਚ ਰੀਸੈਪਟਰਾਂ ਨਾਲ ਇੰਟਰੈਕਟ ਕਰਨ ਅਤੇ ਉਹਨਾਂ ਦੇ ਪੋਸਟ-ਟ੍ਰਾਂਸਲੇਸ਼ਨਲ ਪਰਿਪੱਕਤਾ ਨੂੰ ਵਧਾਉਣ ਲਈ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ (ਬ੍ਰੈਂਡਸਟੈਡਟਰ ਅਤੇ ਮੇਲਾਰਡ, 2019)। ਨੌਚ ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਮਾਰਗ ਮਨੁੱਖੀ ਛਾਤੀ ਦੇ ਕੈਂਸਰ ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਰੱਖ-ਰਖਾਅ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਹੋਣ ਲਈ ਜਾਣਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਅਧਿਐਨਾਂ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਹੈ ਕਿ ਕ੍ਰਿਪਟੋ-1 ਦਾ CRISPR/Cas9-ਮੱਧਮ ਨਾਕਆਊਟ ਕੈਂਸਰ ਦੇ ਵਾਧੇ ਅਤੇ ਮੈਟਾਸਟੈਸਿਸ ਨੂੰ ਦਬਾਉਂਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਲਈ, ਕ੍ਰਿਪਟੋ-1 TNBC ਲਈ ਇੱਕ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਇਲਾਜ ਟੀਚਾ ਬਣ ਸਕਦਾ ਹੈ (ਕਾਸਟ੍ਰੋ ਐਟ ਅਲ., 2015)।
XCL12 ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਅਤੇ ਇਸਦੇ ਕੀਮੋਕਾਈਨ ਰੀਸੈਪਟਰ CXC (CXCR4 ਅਤੇ CXCR7) ਕੈਂਸਰ ਸੈੱਲ ਦੇ ਪ੍ਰਸਾਰ, ਵਿਕਾਸ, ਪ੍ਰਵਾਸ ਅਤੇ ਹਮਲੇ ਵਿੱਚ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਭੂਮਿਕਾਵਾਂ ਨਿਭਾਉਂਦੇ ਹਨ (ਵੂ ਐਟ ਅਲ., 2015)। ਇਹ ਕੀਮੋਰੇਸੈਪਟਰ ਇਨ ਵਿਵੋ ਅਤੇ ਇਨ ਵਿਟਰੋ ਮਾਡਲਾਂ (ਵੂ ਐਟ ਅਲ., 2015) ਦੋਵਾਂ ਵਿੱਚ ਮਲਟੀਪਲ ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਮਾਰਗਾਂ ਰਾਹੀਂ TNBC ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਹੋਏ ਹਨ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, CXCR4 ਅਤੇ CXCR7 ਦੀ ਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲਤਾ TNBC ਵਿੱਚ ਮੈਟਾਸਟੇਸਿਸ ਪ੍ਰਤੀ ਵਧੇਰੇ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ ਅਤੇ ਮਾੜੇ ਪੂਰਵ-ਅਨੁਮਾਨ ਨਾਲ ਜੁੜੀ ਹੋਈ ਹੈ (ਕਰਨ ਐਟ ਅਲ., 2022)। ਇਸ ਲਈ, CXCR4 ਅਤੇ CXCR7 ਦਾ ਨਾਕਆਊਟ ਛਾਤੀ ਦੇ ਕੈਂਸਰ ਦੇ ਇਲਾਜ ਲਈ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ਡਰੱਗ ਟਾਰਗੇਟ ਜੀਨ ਬਣ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ TNBC ਵੀ ਸ਼ਾਮਲ ਹੈ। ਯਾਂਗ ਐਟ ਅਲ ਦੁਆਰਾ ਅਧਿਐਨ। ਯਾਂਗ ਐਟ ਅਲ (2019) ਨੇ CXCR4 ਅਤੇ CXCR7 ਜੀਨਾਂ ਨੂੰ ਸਹਿ-ਨੱਕ ਕਰਨ ਲਈ CRISPR/Cas9 ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਅਤੇ ਪਾਇਆ ਕਿ TNBC ਪ੍ਰਸਾਰ, ਵਿਕਾਸ, ਪ੍ਰਵਾਸ ਅਤੇ ਹਮਲੇ ਨੂੰ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਤੌਰ 'ਤੇ ਰੋਕਿਆ ਗਿਆ ਸੀ (ਯਾਂਗ ਐਟ ਅਲ., 2019)।
ਛਾਤੀ ਦੇ ਕੈਂਸਰ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਵਿੱਚ miR-3662, ਇੱਕ TNBC ਓਨਕੋਜੀਨ, ਦੇ ਵਧੇ ਹੋਏ ਪੱਧਰ ਦੇਖੇ ਗਏ (Yi et al., 2022)। miR-3662 ਦਾ ਨਾਕਡਾਊਨ ਛਾਤੀ ਦੇ ਕੈਂਸਰ ਟਿਊਮਰ ਦੇ ਵਾਧੇ ਅਤੇ ਮੈਟਾਸਟੈਸਿਸ ਨੂੰ ਇਨ ਵੀਵੋ ਅਤੇ ਇਨ ਵਿਟਰੋ ਦੋਵਾਂ ਵਿੱਚ ਰੋਕਦਾ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ (ਅਗਰਵਾਲ ਅਤੇ ਗੁਪਤਾ, 2021)। HBP-1 Wnt/-catenin ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਦਾ ਇੱਕ ਸ਼ਕਤੀਸ਼ਾਲੀ ਇਨਿਹਿਬਟਰ ਹੈ ਅਤੇ ਸੰਭਾਵਤ ਤੌਰ 'ਤੇ TNBC ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ miR-3662-ਮਾਧਿਅਮ ਵਿਕਾਸ ਲਈ ਜ਼ਿੰਮੇਵਾਰ ਹੈ। ਹਾਲ ਹੀ ਵਿੱਚ, Yi et al. ਨੇ ਪਾਇਆ ਕਿ miR-3662-HBP1 ਧੁਰਾ TNBC ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ Wnt/-catenin ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਮਾਰਗ ਨੂੰ ਨਿਯੰਤ੍ਰਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ (Yi et al., 2022)। ਇਸਦੇ ਟਿਊਮਰ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਦੇ ਕਾਰਨ, miR-3662 TNBC ਲਈ ਇੱਕ ਸੰਭਾਵੀ ਇਲਾਜ ਟੀਚਾ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ, TNBC ਦੇ ਇਲਾਜ ਲਈ ਨਵੀਆਂ ਦਵਾਈਆਂ ਵਿਕਸਤ ਕਰਨ ਲਈ miR-3662 ਦਾ CRISPR/Cas9-ਮਾਧਿਅਮ ਨਾਕਡਾਊਨ ਇੱਕ ਸ਼ਾਨਦਾਰ ਪਹੁੰਚ ਹੋ ਸਕਦੀ ਹੈ।
UBR5 ਇੱਕ 300 kDa ਨਿਊਕਲੀਓਫਾਸਫੋਪ੍ਰੋਟੀਨ ਹੈ ਜਿਸਨੂੰ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਕੈਂਸਰਾਂ ਵਿੱਚ ਟਿਊਮਰਜੀਨੇਸਿਸ, ਮੈਟਾਸਟੈਸਿਸ ਅਤੇ ਇਮਿਊਨ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਦੇ ਇੱਕ ਮੁੱਖ ਰੈਗੂਲੇਟਰ ਵਜੋਂ ਪਛਾਣਿਆ ਗਿਆ ਹੈ (ਸ਼ੀਅਰਰ ਐਟ ਅਲ., 2015; ਫੂ ਐਟ ਅਲ., 2023)। UBR5 ਨੂੰ TNBC ਨਮੂਨਿਆਂ ਵਿੱਚ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਅਪਰੇਗੂਲੇਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਦੱਸਿਆ ਗਿਆ ਹੈ ਅਤੇ ਇਸਦੀ ਯੂਬੀਕਿਟਿਨ ਲੀਗੇਸ ਗਤੀਵਿਧੀ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਸਾਰ ਨੂੰ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਰਕੇ ERα ਫੰਕਸ਼ਨ ਨੂੰ ਉਤੇਜਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ (ਬੋਲਟ ਐਟ ਅਲ., 2015)। ਪ੍ਰਾਇਮਰੀ TNBC ਨਮੂਨਿਆਂ ਦੇ ਪੂਰੇ ਐਕਸੋਮ ਸੀਕਵੈਂਸਿੰਗ ਅਧਿਐਨਾਂ ਨੇ ਵੀ UBR5 ਦੀ ਵਧੀ ਹੋਈ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਨੂੰ ਦਿਖਾਇਆ, ਜੋ TNBC ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਵਿੱਚ ਇਸਦੀ ਭੂਮਿਕਾ ਦਾ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, UBR5 ਦੇ CRISPR/Cas9-ਸੰਚਾਲਿਤ ਮਿਟਾਉਣ ਨੇ TNBC ਮੈਟਾਸਟੈਸਿਸ ਦੀ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਰੋਕਥਾਮ ਅਤੇ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਮਾਊਸ ਮਾਡਲਾਂ ਵਿੱਚ ਵਿਕਾਸ ਦਿਖਾਇਆ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਇੱਕ ਜੰਗਲੀ-ਕਿਸਮ ਦੇ ਮਾਊਸ ਮਾਡਲ ਵਿੱਚ UBR5 ਨੂੰ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰਨ ਨਾਲ ਇਸਦੀ ਪੂਰੀ ਕਾਰਜਸ਼ੀਲਤਾ ਬਹਾਲ ਹੋ ਗਈ, ਜਦੋਂ ਕਿ ਇਹ ਪ੍ਰਭਾਵ ਅਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਮਿਊਟੈਂਟ ਸਟ੍ਰੇਨ ਵਿੱਚ ਨਹੀਂ ਦੇਖਿਆ ਗਿਆ (ਲਿਆਓ ਐਟ ਅਲ., 2017)। UBR5 ਦੀ ਘਾਟ TNBC ਵਿੱਚ ਵਧੇ ਹੋਏ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ, ਨੈਕਰੋਸਿਸ ਅਤੇ ਮਾੜੀ ਐਂਜੀਓਜੇਨੇਸਿਸ ਦੇ ਕਾਰਨ ਟਿਊਮਰ ਦੇ ਵਾਧੇ ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਨਾਲ ਜੁੜੀ ਹੋਈ ਹੈ। UBR5 ਦੇ ਨੁਕਸਾਨ ਦੇ ਕਾਰਨ, ਦੂਰ ਦੇ ਅੰਗਾਂ ਵਿੱਚ ਟਿਊਮਰ ਫੈਲਣਾ ਘੱਟ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ UBR5 ਮੁੱਖ ਤੌਰ 'ਤੇ E-ਕੈਡਰਿਨ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਨੂੰ ਘਟਾ ਕੇ ਅਸਧਾਰਨ EMT ਨੂੰ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ (ਝਾਂਗ ਅਤੇ ਵੇਨਬਰਗ, 2018)। ਹਾਲ ਹੀ ਵਿੱਚ, UBR5 ਨੂੰ TNBC ਵਿੱਚ IFN-γ-ਪ੍ਰੇਰਿਤ PDL1 ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਬਹੁਤ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਕਾਰਕ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ ਕਿਉਂਕਿ ਇਸਦੀ E3 ਯੂਬੀਕੁਇਟੀਨੇਸ਼ਨ ਗਤੀਵਿਧੀ ਦੀ ਘਾਟ ਸੀ। RNA ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟੋਮ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਤੋਂ ਪਤਾ ਚੱਲਿਆ ਹੈ ਕਿ UBR5 ਦਾ IFN-γ ਮਾਰਗ ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਜੀਨਾਂ 'ਤੇ ਪ੍ਰਣਾਲੀਗਤ ਪ੍ਰਭਾਵ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਕਿਨੇਜ਼ RNA (PKR) ਅਤੇ ਇਸਦੇ ਸਿਗਨਲ ਟ੍ਰਾਂਸਡਿਊਸਰਾਂ ਅਤੇ ਐਕਟੀਵੇਟਰਾਂ ਦੇ ਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ ਪੱਧਰ ਨੂੰ ਵਧਾ ਕੇ PDL1 ਟ੍ਰਾਂਸਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਉਤਸ਼ਾਹਿਤ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ 1 (STAT1) ਅਤੇ ਇੰਟਰਫੇਰੋਨ ਰੈਗੂਲੇਟਰੀ ਫੈਕਟਰ 1 (IRF1)। ਹਾਲਾਂਕਿ, UBR5 ਅਤੇ PD-L1 ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਦੇ CRISPR/Cas9-ਵਿਚੋਲੇ ਸੰਯੁਕਤ ਐਬਲੇਸ਼ਨ ਦਾ ਇਕੱਲੇ ਨਾਕਾਬੰਦੀ ਨਾਲੋਂ ਇੱਕ ਸਹਿਯੋਗੀ ਇਲਾਜ ਪ੍ਰਭਾਵ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਜਿਸਦਾ ਟਿਊਮਰ ਸੂਖਮ ਵਾਤਾਵਰਣ 'ਤੇ ਡੂੰਘਾ ਪ੍ਰਭਾਵ ਪੈਂਦਾ ਹੈ (ਵੂ ਐਟ ਅਲ., 2022)। ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ, CRISPR/Cas9 UBR5 ਫੰਕਸ਼ਨ ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਲਈ ਇੱਕ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਸਾਧਨ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ TNBC ਮੈਟਾਸਟੈਸਿਸ ਅਤੇ ਟਿਊਮਰ ਦੇ ਵਾਧੇ ਨੂੰ ਦਬਾਉਂਦਾ ਹੈ।
ROR1 ਇੱਕ ਕਿਸਮ I ਟ੍ਰਾਂਸਮੇਮਬ੍ਰੇਨ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਹੈ ਜੋ ਕੈਂਸਰ ਅਤੇ ਭਰੂਣ ਵਿਕਾਸ ਦੌਰਾਨ ਪ੍ਰਗਟ ਹੁੰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਇਸਨੂੰ ਇੱਕ ਓਨਕੋਫੇਟਲ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਵਜੋਂ ਪਛਾਣਿਆ ਗਿਆ ਹੈ (ਨਿਕੋਲਸ ਬੋਰਚਰਡਿੰਗ, 2014)। ਵੱਖ-ਵੱਖ ਮਨੁੱਖੀ ਕੈਂਸਰਾਂ ਦਾ ਹਮਲਾਵਰ ਵਿਵਹਾਰ ROR1 ਦੇ ਉੱਪਰਲੇ ਪੱਧਰ ਨਾਲ ਜੁੜਿਆ ਹੋਇਆ ਹੈ। ROR1 ਨੂੰ ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਬਣਾਉਣ ਵਾਲੇ ਇਲਾਜ ਮਿਸ਼ਰਣਾਂ ਨੂੰ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰਨ ਵਾਲੇ ਇਨ ਵੀਵੋ ਅਤੇ ਇਨ ਵਿਟਰੋ ਅਧਿਐਨਾਂ ਤੋਂ ਵਾਅਦਾ ਕਰਨ ਵਾਲੇ ਨਤੀਜੇ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੇ ਗਏ ਹਨ (ਚੀਅਨ ਐਟ ਅਲ., 2016)। ਛਾਤੀ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ ਬਾਇਓਪਸੀ ਵਿੱਚ ROR1 mRNA ਦੇ ਉੱਚੇ ਪੱਧਰ ਨੂੰ ਹਮਲਾਵਰ ਬੇਸਲ-ਵਰਗੇ ਛਾਤੀ (BL) ਟਿਊਮਰ ਅਤੇ ਸਰੀਰ ਦੇ ਦੂਜੇ ਹਿੱਸਿਆਂ ਵਿੱਚ ਉਨ੍ਹਾਂ ਦੇ ਪ੍ਰਵਾਸ ਨਾਲ ਵੀ ਜੋੜਿਆ ਗਿਆ ਹੈ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ROR1 ਦੇ ਓਵਰਐਕਸਪ੍ਰੈਸ਼ਨ ਨੂੰ TNBC (ਚੀਅਨ ਐਟ ਅਲ., 2016) ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਲਈ ਇੱਕ ਪੂਰਵ-ਅਨੁਮਾਨ ਮਾਰਕਰ ਵਜੋਂ ਪਛਾਣਿਆ ਗਿਆ ਹੈ। ਹਾਲਾਂਕਿ, TNBC ਵਿਕਾਸ ਅਤੇ ਮੈਟਾਸਟੇਸਿਸ ਨੂੰ ਦਬਾਉਣ ਲਈ CRISPR/Cas9 ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ROR1 ਨੂੰ ਚੁੱਪ ਕਰਨਾ ਇੱਕ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ਰਣਨੀਤੀ ਹੋਵੇਗੀ।
ਸਿਆਲੀਲੇਸ਼ਨ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਵਿੱਚ ਗਲਾਈਕੋਕਨਜੁਗੇਟਸ ਵਿੱਚ ਸਿਆਲੀਕ ਐਸਿਡ ਜੋੜਨਾ ਸ਼ਾਮਲ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਸਿਆਲੀਟ੍ਰਾਂਸਫੇਰੇਸ (STs) ਦੁਆਰਾ ਉਤਪ੍ਰੇਰਕ ਹੁੰਦਾ ਹੈ। ST8SIA1 ST ਪਰਿਵਾਰ ਨਾਲ ਸਬੰਧਤ ਹੈ ਅਤੇ ਲਿਮਫੋਸਾਈਟਿਕ ਲਿਊਕੇਮੀਆ ਅਤੇ ਕੋਲੋਰੈਕਟਲ ਕੈਂਸਰ ਵਰਗੀਆਂ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਬਿਮਾਰੀਆਂ ਦੇ ਰੋਗਜਨਨ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਭੂਮਿਕਾ ਨਿਭਾਉਂਦਾ ਹੈ (ਚਾਂਗ ਐਟ ਅਲ., 2018)। RNA ਕ੍ਰਮ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ ਕਿ ST8SIA1 TNBC ਮਰੀਜ਼ਾਂ ਦੇ ਛਾਤੀ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ ਵਿੱਚ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਪ੍ਰਗਟ ਹੁੰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਟਿਊਮਰ ਸਪ੍ਰੈਸਰ ਜੀਨ p53 ਵਿੱਚ ਪਰਿਵਰਤਨ ਨਾਲ ਸਕਾਰਾਤਮਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸੰਬੰਧਿਤ ਹੈ, ਜੋ TNBC (ਬੈਟੁਲਾ ਐਟ ਅਲ., 2017) ਦੇ ਰੋਗਜਨਨ ਵਿੱਚ ਯੋਗਦਾਨ ਪਾ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ST8SIA1 TNBC ਦੇ ਮੈਟਾਸਟੇਸਿਸ ਅਤੇ ਆਵਰਤੀ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਹੈ, ਜੋ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦਾ ਹੈ ਕਿ ਇਹ TNBC ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਅਤੇ ਵਿਕਾਸ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਭੂਮਿਕਾ ਨਿਭਾਉਂਦਾ ਹੈ। TNBC ਦੇ ਇੱਕ ਇਨ ਵਿਟਰੋ ਮਾਡਲ ਵਿੱਚ, CRIPSR/Cas9 ਦੁਆਰਾ ST8SIA1 ਦਾ ਦਸਤਕ ਦੇਣਾ ਵਿਕਾਸ ਅਤੇ ਮੈਟਾਸਟੇਸਿਸ ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਲਈ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ (ਬੈਟੁਲਾ ਐਟ ਅਲ., 2017)। ਇਹ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦਾ ਹੈ ਕਿ CRISPR/Cas9 TNBC ਦੇ ਇਲਾਜ ਵਿੱਚ ST8SIA1 ਓਨਕੋਜੀਨ ਦੇ ਕਾਰਜ ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਲਈ ਇੱਕ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਸਾਧਨ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ।
NAT1 ਇੱਕ ਮੈਟਾਬੋਲਿਕ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਹੈ ਜੋ ਪੜਾਅ II ਜ਼ੈਨੋਬਾਇਓਟਿਕ ਮਿਸ਼ਰਣਾਂ ਦੇ ਗਠਨ ਨੂੰ ਉਤਪ੍ਰੇਰਕ ਕਰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਲਗਭਗ ਸਾਰੇ ਮਨੁੱਖੀ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਗਟ ਹੁੰਦਾ ਹੈ। NAT1 ਸੁਗੰਧਿਤ ਅਮੀਨ ਸਬਸਟਰੇਟ ਦੀ ਅਣਹੋਂਦ ਵਿੱਚ ਵੀ ਐਸੀਟਿਲ-CoA (ਐਸੀਟਿਲ-CoA) ਨੂੰ ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਕੋਫੈਕਟਰ ਫੋਲੇਟ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ (ਸਟੈਪ ਐਟ ਅਲ., 2015; ਲੌਰੀਏਰੀ ਐਟ ਅਲ., 2014)। ਅਧਿਐਨਾਂ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਹੈ ਕਿ NAT1 ਛਾਤੀ ਦੇ ਕੈਂਸਰ ਸੈੱਲ ਮਾਡਲਾਂ ਵਿੱਚ ਮੈਟ੍ਰਿਕਸ ਮੈਟਾਲੋਪ੍ਰੋਟੀਨੇਜ਼ 9 (MMP9) ਫੰਕਸ਼ਨ ਨੂੰ ਨਿਯੰਤ੍ਰਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਗਲੂਕੋਜ਼ ਭੁੱਖਮਰੀ ਦੌਰਾਨ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਆਕਸੀਜਨ ਪ੍ਰਜਾਤੀਆਂ (ROS) ਤੋਂ ਬਚਾਉਂਦਾ ਹੈ (ਵੈਂਗ ਐਟ ਅਲ., 2018)। NAT1 ਨੂੰ ਮਿਟਾਉਣ ਨਾਲ ਪਾਈਰੂਵੇਟ ਡੀਹਾਈਡ੍ਰੋਜਨੇਸ ਕੰਪਲੈਕਸ ਨੂੰ ਰੋਕਿਆ ਗਿਆ ਹੈ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਡਿਸਫੰਕਸ਼ਨ ਹੁੰਦਾ ਹੈ (ਵੈਂਗ ਐਲ. ਐਟ ਅਲ., 2019)। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਕਈ ਹੋਰ ਰਿਪੋਰਟਾਂ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਹੈ ਕਿ ਛੋਟੇ ਅਣੂਆਂ ਅਤੇ siRNA ਸਾਈਲੈਂਸਿੰਗ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ NAT1 ਨੂੰ ਰੋਕਣਾ ਛਾਤੀ ਦੇ ਕੈਂਸਰ ਸੈੱਲਾਂ ਦੀ ਹਮਲਾਵਰਤਾ ਅਤੇ ਪ੍ਰਸਾਰ ਨੂੰ ਘਟਾ ਸਕਦਾ ਹੈ (ਸਟੈਪ ਐਟ ਅਲ., 2018)। ਹਾਲ ਹੀ ਵਿੱਚ, CRISPR/Cas9 ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਛਾਤੀ ਦੇ ਕੈਂਸਰ ਸੈੱਲ ਲਾਈਨ MDA-MB-231 ਵਿੱਚ NAT1 ਨੂੰ ਦਬਾਉਣ ਲਈ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ, ਜੋ ਇਸਦੇ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਦੇ ਪੱਧਰ ਦੇ ਅਧਾਰ ਤੇ ਸੈਲੂਲਰ ਮੈਟਾਬੋਲਿਜ਼ਮ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਤ ਕਰਦੀ ਹੈ। ਇਸ ਅਧਿਐਨ ਨੇ ਇਹ ਵੀ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ NAT-1 TNBC (ਕਾਰਲਿਸਲ ਐਟ ਅਲ., 2020) ਦੀ ਪ੍ਰਗਤੀ ਅਤੇ ਮੈਟਾਸਟੇਸਿਸ ਲਈ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹੈ।
ਓਨਕੋਜੀਨਾਂ ਦਾ ਤਾਲਮੇਲਿਤ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ ਸੁਪਰ ਐਨਹਾਂਸਰ, ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ ਕਾਰਕਾਂ ਅਤੇ ਸਹਿ-ਕਾਰਕਾਂ (Hnisz et al., 2015) ਦੁਆਰਾ ਨਿਯੰਤ੍ਰਿਤ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਸਾਈਕਲਿਨ-ਨਿਰਭਰ ਕਾਇਨੇਸ (CDKs) ਦਾ ਇੱਕ ਸਮੂਹ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ CDK7, CDK8, CDK9, CDK12, ਅਤੇ CDK13, ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨਲ ਰੈਗੂਲੇਸ਼ਨ ਲਈ ਜ਼ਰੂਰੀ ਹਨ। ਉਹਨਾਂ ਵਿੱਚੋਂ, CDK7 RNA ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ II ਦੇ ਫਾਸਫੋਰਿਲੇਸ਼ਨ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ TNBC ਦੇ ਰੋਗਜਨਨ ਵਿੱਚ ਓਨਕੋਜੀਨ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ ਦੀ ਸ਼ੁਰੂਆਤ ਅਤੇ ਵਿਸਥਾਰ ਲਈ ਬਹੁਤ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹੈ। ਇੱਕ ਮੁੱਖ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ, CRISPR/Cas9 ਦੁਆਰਾ CDK7 ਨੂੰ ਮਿਟਾਉਣ ਨੇ TNBC ਨੂੰ ਰੋਕਿਆ, ਜੋ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ ਕਿ TNBC ਦਾ ਰੋਗਜਨਨ CDK7 'ਤੇ ਨਿਰਭਰ ਹੈ (Wang Y. et al., 2015)।
ਅਧਿਐਨਾਂ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਹੈ ਕਿ MYC ਅਤੇ RBP (RNA ਬਾਈਡਿੰਗ ਪ੍ਰੋਟੀਨ) ਵਿੱਚ ਪਰਿਵਰਤਨ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣ ਸਕਦੇ ਹਨ, ਜਦੋਂ ਕਿ MYC ਜਾਂ RBP ਵਿੱਚ ਸਿੰਗਲ ਜੀਨ ਪਰਿਵਰਤਨ ਕੈਂਸਰ ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਵਾਧੇ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਤ ਨਹੀਂ ਕਰਦੇ (ਆਈਨਸਟਾਈਨ ਐਟ ਅਲ., 2021)। ਮਨੁੱਖੀ ਜੀਨੋਮ ਵਿੱਚ 1000 ਤੋਂ ਵੱਧ RBPs ਦੀ ਜਾਂਚ CRISPR/Cas9-ਅਧਾਰਤ ਲਾਇਬ੍ਰੇਰੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕੀਤੀ ਗਈ ਹੈ। ਉਨ੍ਹਾਂ ਵਿੱਚੋਂ, 57 RBPs ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਉੱਚੇ MYC ਪੱਧਰਾਂ ਵਾਲੇ ਕੈਂਸਰ ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਵਾਧੇ ਲਈ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਪਾਏ ਗਏ (ਵ੍ਹੀਲਰ ਐਟ ਅਲ., 2020)। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, YTHDF2 TNBC ਸੈੱਲ ਵਿਕਾਸ ਨੂੰ ਬਣਾਈ ਰੱਖਣ ਲਈ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹੈ ਅਤੇ ਉੱਚ MYC ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਵਾਲੇ ਕੈਂਸਰ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਉੱਚ-ਪੱਧਰੀ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ ਅਤੇ ਅਨੁਵਾਦ ਦੌਰਾਨ ਮਿਥਾਈਲੇਟਿਡ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟਾਂ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ਘਟਾਉਂਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, YTHDF2 ਕੈਂਸਰ ਸੈੱਲਾਂ ਲਈ ਜ਼ਰੂਰੀ ਨਹੀਂ ਹੈ, ਜੋ TNBC ਮਰੀਜ਼ਾਂ ਦੇ ਬਚਾਅ ਨੂੰ ਲੰਮਾ ਕਰਨ ਲਈ ਉੱਚੇ MYC ਪੱਧਰਾਂ 'ਤੇ ਘੱਟ ਨਿਰਭਰ ਹਨ (ਆਈਨਸਟਾਈਨ ਐਟ ਅਲ., 2021), ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦਾ ਹੈ ਕਿ ਇਹ ਉਹਨਾਂ ਦਵਾਈਆਂ ਲਈ ਇੱਕ ਸੰਭਾਵੀ ਇਲਾਜ ਟੀਚਾ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ ਜੋ TNBC ਨੂੰ ਦੂਰ ਕਰ ਸਕਦੀਆਂ ਹਨ।
ਜ਼ਿੰਕ ਫਿੰਗਰ ਪ੍ਰੋਟੀਨ (ZNFs) ਕੁੱਲ ਮਨੁੱਖੀ ਜੀਨੋਮ ਦਾ ਲਗਭਗ 1% ਬਣਾਉਂਦੇ ਹਨ। ਅਧਿਐਨਾਂ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਹੈ ਕਿ ZNF ਵੱਖ-ਵੱਖ ਕੈਂਸਰਾਂ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਜਿਗਰ ਦੇ ਕੈਂਸਰ, ਛਾਤੀ ਦੇ ਕੈਂਸਰ ਅਤੇ ਕੋਲੋਰੈਕਟਲ ਕੈਂਸਰ (Zhang W. et al., 2021; Li et al., 2017) ਵਿੱਚ ਸੈੱਲ ਪ੍ਰਸਾਰ ਨੂੰ ਨਿਯੰਤ੍ਰਿਤ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ। CRISPR ਨਾਕਆਊਟ ਦੁਆਰਾ ਤਿਆਰ ਕੀਤੀਆਂ ਲਾਇਬ੍ਰੇਰੀਆਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਛਾਤੀ ਦੇ ਕੈਂਸਰ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਟਿਊਮਰ ਸਪ੍ਰੈਸਰ ਜੀਨਾਂ (TSGs) ਦੀ ਜਾਂਚ ਕਰਨ ਲਈ ਕੀਤੀ ਗਈ ਹੈ (Shalem et al., 2014)। ਉਦੋਂ ਤੋਂ, CRISPR/Cas9 ZNF319-ਮਿਟਾਏ ਗਏ ਛਾਤੀ ਦੇ ਕੈਂਸਰ ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਇੱਕ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟੋਮਿਕ ਅਧਿਐਨ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਹੈ ਕਿ ZNF319 ਇੱਕ ਟਿਊਮਰ ਸਪ੍ਰੈਸਰ ਜੀਨ ਹੈ ਜੋ ਛਾਤੀ ਦੇ ਕੈਂਸਰ ਦੇ ਪ੍ਰਸਾਰ ਨੂੰ ਘਟਾਉਂਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਇਸ ਲਈ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੰਭਾਵੀ ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਵਿਧੀਆਂ ਅਤੇ ਹੋਰ ਜੈਵਿਕ ਕਾਰਜਾਂ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਹੈ (Wang L. et al., 2022)।
ਫੇਰੋਪਟੋਸਿਸ ਇੱਕ ਕਿਸਮ ਦੀ ਪ੍ਰੋਗਰਾਮ ਕੀਤੀ ਸੈੱਲ ਮੌਤ ਹੈ ਜੋ ਆਇਰਨ ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ 'ਤੇ ਨਿਰਭਰ ਕਰਦੀ ਹੈ। ਇਹ ਜਾਣਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਕਿ ਫੇਰੋਪਟੋਸਿਸ ਦਾ ਵਿਕਾਸ ਲਿਪਿਡ ਪਰਆਕਸਾਈਡ ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਹੁੰਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, PKCβII ਨੂੰ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਲਿਪਿਡ ਪਰਆਕਸਾਈਡੇਸ਼ਨ ਪ੍ਰਦਰਸ਼ਿਤ ਕਰਨ ਦੀ ਰਿਪੋਰਟ ਕੀਤੀ ਗਈ ਹੈ, ਅਤੇ ਵਧਿਆ ਹੋਇਆ ਲਿਪਿਡ ਪਰਆਕਸਾਈਡੇਸ਼ਨ ਫੈਰੋਪੋਟੋਸਿਸ ਨਾਲ ਜੁੜਿਆ ਹੋਇਆ ਹੈ। CRISPR/Cas9-ਮੀਡੀਏਟਿਡ ਕਿਨੇਜ਼ ਇਨਿਹਿਬਟਰਾਂ ਦੀ ਇੱਕ ਲਾਇਬ੍ਰੇਰੀ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕਰਨ ਤੋਂ ਪਤਾ ਲੱਗਾ ਕਿ PKCβII ਲਿਪਿਡ ਪਰਆਕਸਾਈਡੇਸ਼ਨ ਦੀ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ MDA-MB-231 ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਫੇਰੋਪਟੋਸਿਸ ਲਈ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹੈ (ਝਾਂਗ ਐਟ ਅਲ., 2022)। ਇਸ ਲਈ, ਇਹ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦਾ ਹੈ ਕਿ CRISPR/Cas9 ਦੁਆਰਾ PKCβII ਦਾ ਨਾਕਆਊਟ ਫੈਰੋਪੋਟੋਸਿਸ-ਸਬੰਧਤ ਬਿਮਾਰੀਆਂ ਦੇ ਇਲਾਜ ਲਈ ਇੱਕ ਸੰਭਾਵੀ ਟਿਊਮਰ ਦਮਨ ਕਰਨ ਵਾਲਾ ਜੀਨ ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ (ਝਾਂਗ ਐਟ ਅਲ., 2022)।
ਮੰਨਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਕਿ ਕੈਂਸਰ ਦੇ ਮਰੀਜ਼ਾਂ ਵਿੱਚ ਲਗਭਗ 90% ਮੌਤਾਂ ਲਈ ਡਰੱਗ ਪ੍ਰਤੀਰੋਧ ਜ਼ਿੰਮੇਵਾਰ ਹੈ ਅਤੇ ਇਹ ਕੈਂਸਰ ਦੇ ਇਲਾਜ ਵਿੱਚ ਵੱਡੀਆਂ ਚੁਣੌਤੀਆਂ ਵਿੱਚੋਂ ਇੱਕ ਹੈ (ਬੁਕੋਵਸਕੀ ਐਟ ਅਲ., 2020)। ਨਤੀਜੇ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ ਕਿ ਡਰੱਗ ਇਫਲਕਸ, ਡੀਐਨਏ ਰਿਪੇਅਰ, ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ ਅਤੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੈੱਲ ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਮਾਰਗਾਂ ਨਾਲ ਸਬੰਧਤ ਕਾਫ਼ੀ ਗਿਣਤੀ ਵਿੱਚ ਜੀਨ ਡਰੱਗ ਪ੍ਰਤੀਰੋਧ ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਹੋਏ ਹਨ (ਹੈਦਰ ਐਟ ਅਲ., 2020)। ਉਨ੍ਹਾਂ ਵਿੱਚੋਂ, CRISPR/Cas9 ਟੂਲਸ ਦੁਆਰਾ ਕਈ ਜੀਨਾਂ ਨੂੰ ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਬਣਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ ਅਤੇ ਡਰੱਗ ਪ੍ਰਤੀਰੋਧ ਨੂੰ ਘਟਾਉਣ ਅਤੇ ਕੈਂਸਰ-ਵਿਰੋਧੀ ਇਲਾਜਾਂ ਦੀ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ੀਲਤਾ ਨੂੰ ਵਧਾਉਣ ਵਿੱਚ ਵਾਅਦਾ ਕਰਨ ਵਾਲੇ ਨਤੀਜੇ ਦਿਖਾਏ ਹਨ (ਵਾਘਾਰੀ-ਤਾਬਾਰੀ ਐਟ ਅਲ., 2022)। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਉੱਚ-ਥਰੂਪੁੱਟ CRISPR/Cas9 ਜੀਨ ਨਾਕਆਊਟ ਸਕ੍ਰੀਨਿੰਗ ਲਾਇਬ੍ਰੇਰੀਆਂ ਨੂੰ ਸੰਭਾਵੀ ਡਰੱਗ ਪ੍ਰਤੀਰੋਧ ਜੀਨ ਟੀਚਿਆਂ ਦੇ ਕਾਰਜ ਨੂੰ ਸੋਧਣ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ (ਸ਼ਾਲੇਮ ਐਟ ਅਲ., 2015)। ਪੈਕਲੀਟੈਕਸਲ ਪ੍ਰਤੀਰੋਧ ਜੀਨਾਂ ਦੀ ਪਛਾਣ ਕਰਨ ਲਈ, ਜੀਨੋਮ-ਵਾਈਡ sgRNA ਲਾਇਬ੍ਰੇਰੀ ਸਕ੍ਰੀਨਿੰਗ ਦੇ ਨਾਲ RNA ਸੀਕੁਐਂਸਿੰਗ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਅੱਠ ਉਮੀਦਵਾਰ ਜੀਨਾਂ ਦੀ ਪਛਾਣ ਕਰਨ ਲਈ ਕੀਤੀ ਗਈ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਹਿਸਟੋਨ ਡੀਐਸੀਟਾਈਲੇਸ 9 (HDAC9) ਸ਼ਾਮਲ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਆਵਰਤੀ TNBC (B et al., 2020) ਵਾਲੇ ਮਰੀਜ਼ਾਂ ਵਿੱਚ ਡਰੱਗ ਪ੍ਰਤੀਰੋਧ ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਹੋਏ ਹਨ। ਇੱਕ ਹੋਰ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ, ਕੈਂਸਰ ਵਿਰੋਧੀ ਦਵਾਈਆਂ ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਕੀਤੇ ਗਏ TNBC ਮਰੀਜ਼ਾਂ ਦੇ ਬਚਾਅ ਦੌਰਾਨ ਡਿਸਰੀਨ/ਥ੍ਰੀਓਨਾਈਨ ਅਤੇ ਟਾਈਰੋਸਾਈਨ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਕਿਨੇਜ਼ (DSTYK) ਦੀ ਵਧੀ ਹੋਈ ਪ੍ਰਗਟਾਵਾ ਦੇਖਿਆ ਗਿਆ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, DSTYK ਦੇ CRISPR/Cas9-ਮੱਧਮ ਦਸਤਕ ਨੇ ਇਨ ਵਿਟਰੋ (SUM102PT ਸੈੱਲ ਅਤੇ MDA-MB-468 ਸੈੱਲ) ਅਤੇ ਇੱਕ ਇਨ ਵੀਵੋ TNBC ਮਾਡਲ (Ogbu et al., 2021) ਵਿੱਚ ਡਰੱਗ-ਰੋਧਕ ਕੈਂਸਰ ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ ਨੂੰ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਧਾਇਆ।
ਹਾਲਾਂਕਿ TNBC ਵਿੱਚ MAPK ਮਾਰਗ ਦੀ ਅਸਧਾਰਨ ਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲਤਾ ਹੈ, MEK-ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਥੈਰੇਪੀਆਂ ਦਾ ਕਲੀਨਿਕਲ ਪ੍ਰਭਾਵ ਮਾੜਾ ਹੈ। ਇੱਕ CRISPR/Cas9 ਜੀਨੋਮਿਕ ਲਾਇਬ੍ਰੇਰੀ ਸਕ੍ਰੀਨ ਨੇ ਖੁਲਾਸਾ ਕੀਤਾ ਕਿ PSMG2 (ਪ੍ਰੋਟੀਓਮ ਅਸੈਂਬਲੀ ਚੈਪਰੋਨ 2) ਦੀ ਰੋਕਥਾਮ TNBC BT549 ਅਤੇ MB468 ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ MEK ਇਨਿਹਿਬਟਰ AZD6244 ਪ੍ਰਤੀ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ ਬਣਾਉਂਦੀ ਹੈ। PSMG2 ਦੇ CRISPR/Cas9 ਦੇ ਨਾਕਡਾਊਨ ਨੇ ਆਮ ਪ੍ਰੋਟੀਸੋਮ ਫੰਕਸ਼ਨ ਨੂੰ ਬਦਲ ਦਿੱਤਾ, ਜਿਸ ਨਾਲ PDPK1 ਦੀ ਆਟੋਫੈਜੀ-ਮੱਧਮਤਾ ਵਾਲੀ ਡਿਸਸੈਂਬਲੀ ਹੋਈ, ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ AZD6244 (MEK ਇਨਿਹਿਬਟਰ) ਅਤੇ MG132 (ਪ੍ਰੋਟੀਸੋਮ ਇਨਿਹਿਬਟਰ) ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰੇਰਿਤ TNBC ਮਾਊਸ ਮਾਡਲਾਂ ਵਿੱਚ ਟਿਊਮਰ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਹੋਰ ਸੁਧਾਰ ਹੋਇਆ। ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ, ਟਿਊਮਰ ਸੈੱਲ ਪ੍ਰਸਾਰ ਨੂੰ ਘਟਾਉਣ ਲਈ ਪ੍ਰੋਟੀਸੋਮ ਅਤੇ MAP ਕਿਨੇਜ਼ (MEK) ਇਨਿਹਿਬਟਰਾਂ ਨੂੰ ਸਹਿਯੋਗੀ ਢੰਗ ਨਾਲ ਪ੍ਰਬੰਧਿਤ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ (ਵੈਂਗ ਐਕਸ. ਐਟ ਅਲ., 2022)।
CRISPR/Cas9 ਦੀ ਵਰਤੋਂ TNBC ਪ੍ਰਤੀਰੋਧ ਵੱਲ ਲੈ ਜਾਣ ਵਾਲੇ ਜੀਨ ਫੰਕਸ਼ਨ ਦੇ ਨੁਕਸਾਨ ਦੀ ਜਾਂਚ ਲਈ ਵੀ ਕੀਤੀ ਗਈ ਹੈ (ਸ਼ੂ ਐਟ ਅਲ., 2020)। Ge et al ਨੇ TNBC ਵਿੱਚ JQ1, ਇੱਕ BET ਬ੍ਰੋਮੋਡੋਮੇਨ ਇਨਿਹਿਬਟਰ (BBDI) ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਕੀਤੇ ਗਏ ਕੈਂਸਰ ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਡਰੱਗ ਪ੍ਰਤੀਰੋਧ ਦੀ ਵਿਧੀ ਬਾਰੇ ਦੱਸਿਆ। CRISPR/Cas9 ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ, ਉਨ੍ਹਾਂ ਨੇ ਪਾਇਆ ਕਿ rb1 ਜੀਨ ਨੂੰ ਮਿਟਾਉਣ ਨਾਲ TNBC ਕੈਂਸਰ ਵਿਰੋਧੀ ਦਵਾਈ JQ1 ਪ੍ਰਤੀ ਰੋਧਕ ਬਣ ਗਿਆ। ਇਸ ਲਈ, TNBC ਵਿੱਚ JQ1 ਦਵਾਈਆਂ ਦੇ ਜਵਾਬ ਵਿੱਚ rb1 ਫੰਕਸ਼ਨ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹੈ। ਉਨ੍ਹਾਂ ਨੇ ਇਹ ਵੀ ਦੱਸਿਆ ਕਿ ਪੈਕਲੀਟੈਕਸਲ ਇੱਕ CDK4/6 kinase/microtubule ਇਨਿਹਿਬਟਰ ਹੈ, ਅਤੇ JQ1 ਵਰਗੇ BBDIs ਨਾਲ ਇਸਦਾ ਸੁਮੇਲ ਡਰੱਗ-ਰੋਧਕ TNBC (Ge et al., 2020) ਲਈ ਵਾਅਦਾ ਕਰਨ ਵਾਲੇ ਇਲਾਜ ਸੰਬੰਧੀ ਜਵਾਬ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ।
ਲੰਬੇ ਨਾਨਕੋਡਿੰਗ RNA (lncRNA) ਦੇ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨਲ ਲੈਂਡਸਕੇਪ ਨੂੰ TNBC ਵਿੱਚ ਨਿਓਐਡਜੁਵੈਂਟ ਥੈਰੇਪੀ ਪ੍ਰਤੀ ਵਿਰੋਧ ਲਈ ਜ਼ਿੰਮੇਵਾਰ ਦੱਸਿਆ ਗਿਆ ਹੈ। ਇਹ ਅਧਿਐਨ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ ਕਿ TNBC ਵਿੱਚ ਪੰਜ ਵੱਖ-ਵੱਖ MALAT1 lncRNA ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟਾਂ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਪ੍ਰਗਟ ਕੀਤੀਆਂ ਗਈਆਂ ਹਨ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, MALAT1 ਦੇ CRISPR/Cas9-ਮੱਧਮ ਮਿਟਾਉਣ ਨੇ TNBC BT-549 ਸੈੱਲਾਂ ਦੀ ਪੈਕਲੀਟੈਕਸਲ ਅਤੇ ਡੌਕਸੋਰੂਬਿਸਿਨ ਪ੍ਰਤੀ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ ਨੂੰ ਵਧਾ ਦਿੱਤਾ, ਜੋ TNBC ਵਿੱਚ MALAT1 ਪ੍ਰਤੀਰੋਧ ਲਈ ਇੱਕ ਸੰਭਾਵੀ ਭੂਮਿਕਾ ਦਾ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦਾ ਹੈ (ਸ਼ਾਥ ਐਟ ਅਲ., 2021)।
BRCA1 (BRCA1m) ਵਿੱਚ ਪਰਿਵਰਤਨ ਵਿਭਿੰਨ ਹਨ ਅਤੇ ਇਸ ਲਈ ਉਹਨਾਂ ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾਉਣਾ ਮੁਸ਼ਕਲ ਹੈ। BRCA1 ਦੇ ਸਿੰਥੈਟਿਕ ਘਾਤਕ ਸਾਥੀ, PARP1 (ਪੌਲੀ(ADP-ਰਾਈਬੋਜ਼) ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਨੂੰ ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਬਣਾਉਣਾ, TNBC ਡਰੱਗ ਕੀਮੋਸੈਂਸੀਟੀਵਿਟੀ ਨੂੰ ਵਧਾ ਸਕਦਾ ਹੈ। CRISPR/Cas9 ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ, PARP1 ਨੂੰ ਮਿਟਾਉਣ ਨਾਲ mBRCA1 ਮਿਊਟੈਂਟ TNBC ਸੈੱਲਾਂ ਪ੍ਰਤੀ ਕੈਂਸਰ ਵਿਰੋਧੀ ਦਵਾਈਆਂ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਡੌਕਸੋਰੂਬਿਸਿਨ, ਜੈਮਸੀਟਾਬਾਈਨ ਅਤੇ ਡੋਸੀਟੈਕਸਲ ਦੀ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ ਵਧ ਗਈ, ਜੋ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦੀ ਹੈ ਕਿ PARP1 TNBC ਵਿੱਚ ਡਰੱਗ ਪ੍ਰਤੀਰੋਧ ਵਿੱਚ ਵੀ ਸ਼ਾਮਲ ਹੈ (Vaghari-Tabari et al., 2022)। ਟਿਊਮਰ ਨੂੰ ਦਬਾਉਣ ਵਾਲੇ ਜੀਨਾਂ BRCA1 ਜਾਂ BRCA2 ਵਿੱਚ ਪਰਿਵਰਤਨ ਲੋਕਾਂ ਵਿੱਚ ਛਾਤੀ ਦੇ ਕੈਂਸਰ ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਦੀ ਸੰਭਾਵਨਾ ਨੂੰ ਵਧਾਉਣ ਲਈ ਜਾਣੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ। ਇਹਨਾਂ ਮਰੀਜ਼ਾਂ ਦੇ ਇਲਾਜ ਲਈ PARP ਇਨਿਹਿਬਟਰਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਇਹ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ ਕਿ CRISPR/Cas9 ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਨਿਊਕਲੀਓਟਾਈਡ ਸੈਲਵੇਜ ਫੈਕਟਰ DNPH1 ਦਾ ਨਾਕਆਊਟ ਜ਼ਹਿਰੀਲੇ ਨਿਊਕਲੀਓਟਾਈਡ 5-ਹਾਈਡ੍ਰੋਕਸਾਈਮਿਥਾਈਲਡੀਓਕਸਯੂਰੀਡੀਨ (hmdU) ਮੋਨੋਫੋਸਫੇਟ ਨੂੰ ਹਟਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਨਾਲ PARP ਇਨਿਹਿਬਟਰਾਂ (Fugger) ਪ੍ਰਤੀ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ ਪ੍ਰਤੀ BRCA-ਘਾਟ ਵਾਲੇ ਸੈੱਲਾਂ ਦੀ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਵਧਦੀ ਹੈ। ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ, CRISPR/Cas9 ਅਤੇ PARP1 ਇਨਿਹਿਬਟਰ TNBC ਲਈ ਇੱਕ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਇਲਾਜ ਰਣਨੀਤੀ ਬਣ ਸਕਦੇ ਹਨ।
ਪ੍ਰਵੇਸ਼ ਕਰਨ ਵਾਲਾ ਗਲਾਈਕੋਪ੍ਰੋਟੀਨ (P-gp) ਜੀਨ ਇੱਕ ਮਲਟੀਡਰੱਗ ਰੋਧਕ ਜੀਨ ਹੈ ਜੋ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸਾਰੇ TNBC ਦੇ ਲਗਭਗ 41% ਵਿੱਚ ਉੱਪਰ ਹੁੰਦਾ ਹੈ (ਸਨ ਐਟ ਅਲ., 2020)। P-gp-ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਡਰੱਗ ਇਫਲਕਸ ਨੂੰ ਛਾਤੀ ਦੇ ਕੈਂਸਰ ਵਿੱਚ ਡਰੱਗ ਪ੍ਰਤੀਰੋਧ ਦੇ ਇੱਕ ਮੁੱਖ ਰੈਗੂਲੇਟਰ ਵਜੋਂ ਪਛਾਣਿਆ ਗਿਆ ਹੈ। P-gp ਇਨਿਹਿਬਟਰਾਂ ਨੇ ਛਾਤੀ ਦੇ ਕੈਂਸਰ ਵਿੱਚ ਕੈਂਸਰ ਵਿਰੋਧੀ ਦਵਾਈਆਂ ਪ੍ਰਤੀ ਵਧੀ ਹੋਈ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ ਦਾ ਪ੍ਰਦਰਸ਼ਨ ਕੀਤਾ ਹੈ (Famta et al., 2021)। ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ, TNBC ਵਿੱਚ ਡਰੱਗ ਪ੍ਰਤੀਰੋਧ ਨੂੰ ਦੂਰ ਕਰਨ ਲਈ CRISPR/Cas9-ਮਾਧਿਅਮ ਨਾਲ P-gp ਅਤੇ P-gp ਇਨਿਹਿਬਟਰਾਂ ਦਾ ਐਬਲੇਸ਼ਨ ਜਾਂ ਦਮਨ ਬਹੁਤ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਤਰੀਕੇ ਹੋ ਸਕਦੇ ਹਨ।
ATP-ਬਾਈਡਿੰਗ ਕੈਸੇਟ ਟ੍ਰਾਂਸਪੋਰਟਰ G2 (ABCG2) TNBC (Palasuberniam et al., 2015) ਵਿੱਚ ਡਰੱਗ ਪ੍ਰਤੀਰੋਧ ਪੈਦਾ ਕਰਨ ਲਈ ਜਾਣਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਹਾਲਾਂਕਿ ਇਸ ਸਮੇਂ CRISPR/Cas9 ਅਤੇ ABCG2 ਦੇ ਸਾਈਲੈਂਸਿੰਗ ਅਤੇ ਟਿਊਮਰ ਸਪ੍ਰੈਸਰ ਜੀਨ ਇਨਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ ਵਿਚਕਾਰ ਸਬੰਧਾਂ ਬਾਰੇ ਕੋਈ ਰਿਪੋਰਟ ਨਹੀਂ ਹੈ। PTEN ABCG2 ਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਵਧਾ ਸਕਦਾ ਹੈ (Palasuberniam et al., 2015), (ਦੀਪਕ ਸਿੰਘ et al., 2021)। ਇਸ ਲਈ, ABCG2 ਨੂੰ ਹਟਾਉਣ ਲਈ CRISP/Ca9 ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨਾ ਅਤੇ ਇਸਨੂੰ ABCG2 ਇਨਿਹਿਬਟਰ ਨਾਲ ਜੋੜਨਾ TNBC ਵਿੱਚ ਡਰੱਗ ਪ੍ਰਤੀਰੋਧ ਨੂੰ ਦੂਰ ਕਰਨ ਲਈ ਇੱਕ ਢੁਕਵਾਂ ਇਲਾਜ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਸਾਰਣੀ 2 ਵਿੱਚ CRISPR/Cas9 ਦਾ ਜ਼ਿਕਰ ਹੈ ਜੋ ਸਾਰੇ ਪ੍ਰਤੀਰੋਧ ਜੀਨਾਂ ਨੂੰ ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ।
ਸਾਰਣੀ 2. CRISPR/Cas9 ਕੈਂਸਰ ਵਿਰੋਧੀ ਦਵਾਈਆਂ ਪ੍ਰਤੀ ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਵੱਖ-ਵੱਖ TNBC ਰੋਧਕ ਜੀਨਾਂ ਨੂੰ ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ।
CRISPR/Cas9 ਲਾਇਬ੍ਰੇਰੀਆਂ ਕੈਂਸਰ ਰੋਗਜਨਨ ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਜੀਨ ਪਰਿਵਰਤਨ ਦੀ ਜਾਂਚ ਲਈ ਸੰਭਾਵੀ ਸਾਧਨ ਹਨ (ਚੈਨ ਐਟ ਅਲ., 2022)। ਇਸ ਸਕ੍ਰੀਨਿੰਗ ਵਿਧੀ ਵਿੱਚ ਚਾਰ ਪੜਾਅ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ ਜਿਵੇਂ ਕਿ (a) ਲਾਇਬ੍ਰੇਰੀ ਨਿਰਮਾਣ, (b) ਲੈਂਟੀਵਾਇਰਲ ਟ੍ਰਾਂਸਡਕਸ਼ਨ, (c) ਫੀਨੋਟਾਈਪਿਕ ਸਕ੍ਰੀਨਿੰਗ, ਅਤੇ (d) ਟਾਰਗੇਟ ਜੀਨ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ। ਹਾਲਾਂਕਿ TNBC ਵਿੱਚ MAPK ਮਾਰਗ ਦੀ ਅਸਧਾਰਨ ਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲਤਾ ਹੈ, PTEN, RB1, ਅਤੇ TP53 ਵਰਗੇ ਟਿਊਮਰ ਸਪ੍ਰੈਸਰ ਜੀਨਾਂ ਵਿੱਚ ਪਰਿਵਰਤਨ ਲੈ ਰਹੇ TNBC ਮਰੀਜ਼ਾਂ ਲਈ MEK ਟਾਰਗੇਟਡ ਥੈਰੇਪੀ ਦਾ ਕਲੀਨਿਕਲ ਪੂਰਵ-ਅਨੁਮਾਨ ਬਹੁਤ ਮਾੜਾ ਹੈ।
ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, CRISPR/Cas9 ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਇੱਕ ਜੀਨ ਨਾਕਆਊਟ ਸਕ੍ਰੀਨ ਨੇ ਸਭ ਤੋਂ ਸ਼ਕਤੀਸ਼ਾਲੀ ਅਤੇ ਚੋਣਵੇਂ ਅਣੂ, ਡੀਹਾਈਡ੍ਰੋਕੈਟ੍ਰੋਲ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ, ਜੋ ਕਿ ਗੁਆਟੇਮਾਲਾ ਦੇ ਫੁੱਲਾਂ ਅਤੇ ਪੱਤਿਆਂ ਦੇ ਐਬਸਟਰੈਕਟ ਵਿੱਚ ਭਰਪੂਰ ਹੈ, ਤਾਂ ਜੋ MDA-MB-231 'ਤੇ ਡੀਹਾਈਡ੍ਰੋਕੈਟ੍ਰੋਲ ਦੇ ਪ੍ਰਭਾਵ ਨੂੰ ਸਮਝਿਆ ਜਾ ਸਕੇ। ਚੋਣਵੇਂ ਸੈੱਲ ਸਾਈਟੋਟੌਕਸਿਟੀ ਦੇ ਤੰਤਰ। TNBC ਉਪ-ਕਿਸਮਾਂ ਦੀਆਂ ਮੇਸੇਨਚਾਈਮਲ ਸਟੈਮਨੇਸ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾਵਾਂ। ਇਸ CRISPR/Cas9-ਅਧਾਰਤ ਸਕ੍ਰੀਨ ਨੇ ਇਹ ਵੀ ਖੁਲਾਸਾ ਕੀਤਾ ਕਿ HSD17B11, 17β-ਹਾਈਡ੍ਰੋਕਸਾਈਸਟੀਰੋਇਡ ਡੀਹਾਈਡ੍ਰੋਜਨੇਸ ਟਾਈਪ 11 ਨੂੰ ਏਨਕੋਡ ਕਰਨ ਵਾਲਾ ਇੱਕ ਜੀਨ, MDA-MB-231 ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਪ੍ਰਗਟ ਹੁੰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ MDA-MB-231 ਸੈੱਲਾਂ ਲਈ ਖਾਸ ਡੀਹਾਈਡ੍ਰੋਫਾਲਕਾਰਿਨੋਲ ਹੁੰਦਾ ਹੈ (ਗ੍ਰਾਂਟ ਐਟ. ਅਲ., 2020)। ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ, ਇਹ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦਾ ਹੈ ਕਿ CRISPR/Cas9 ਜੀਨੋਮਿਕ ਸਕ੍ਰੀਨਿੰਗ ਵਿੱਚ ਸੰਭਾਵੀ ਕੁਦਰਤੀ ਮਿਸ਼ਰਣਾਂ ਦੇ ਕੈਂਸਰ ਵਿਰੋਧੀ ਗੁਣਾਂ ਦੇ ਅੰਤਰੀਵ ਵਿਧੀਆਂ ਦੀ ਪਛਾਣ ਕਰਨ ਵਿੱਚ ਬਹੁਤ ਸੰਭਾਵਨਾ ਹੈ।
ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਇੱਕ ਨਿਰਪੱਖ ਜੀਨੋਮ-ਵਾਈਡ ਇਨ ਵੀਵੋ CRISPR/Cas9 ਸਕ੍ਰੀਨ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ TNBC ਦੀ ਕੈਂਸਰ ਪ੍ਰਤੀ ਕਮਜ਼ੋਰੀ ਦਾ ਅਧਿਐਨ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਜਿਸ ਨੇ ਓਨਕੋਜੈਨਿਕ ਅਤੇ ਟਿਊਮਰ ਸਪ੍ਰੈਸਰ ਮਾਰਗਾਂ ਵਿਚਕਾਰ ਇੱਕ ਸਬੰਧ ਦਿਖਾਇਆ। mTOR ਅਤੇ Hippo ਮਾਰਗਾਂ ਦੇ ਮੁੱਖ ਹਿੱਸਿਆਂ ਨੂੰ TNBC ਵਿੱਚ ਟਿਊਮਰ ਨਿਯਮਨ ਵਿੱਚ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਭੂਮਿਕਾ ਨਿਭਾਉਣ ਦੀ ਰਿਪੋਰਟ ਕੀਤੀ ਗਈ ਹੈ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਅਧਿਐਨਾਂ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਹੈ ਕਿ mTORC1/2 ਅਤੇ YAP ਓਨਕੋਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦਾ ਫਾਰਮਾਕੋਲੋਜੀਕਲ ਇਨਹਿਬਿਸ਼ਨ ਇੱਕ ਇਨ ਵਿਟਰੋ ਡਰੱਗ-ਮੈਟ੍ਰਿਕਸ ਸਿਨਰਜੀ ਮਾਡਲ ਅਤੇ ਇਨ ਵੀਵੋ ਮਰੀਜ਼-ਪ੍ਰਾਪਤ ਜ਼ੈਨੋਗ੍ਰਾਫਟਸ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ TNBC ਦੀ ਜਰਾਸੀਮਤਾ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ਢੰਗ ਨਾਲ ਰੋਕਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਟੋਰਿਨ-1-ਮਾਧਿਅਮ mTORC1/2 ਇਨਹਿਬਿਸ਼ਨ ਮੈਕਰੋਪਿਨੋਸਾਈਟੋਸਿਸ ਨੂੰ ਵਧਾਉਂਦਾ ਹੈ, ਜਦੋਂ ਕਿ ਵਰਟੀਪੋਰਫਿਨ-ਪ੍ਰੇਰਿਤ YAP ਇਨਹਿਬਿਸ਼ਨ TNBC ਸੈੱਲ ਦੀ ਮੌਤ ਵੱਲ ਲੈ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਇਕੱਠੇ ਲਏ ਜਾਣ 'ਤੇ, ਇਹ ਨਤੀਜੇ TNBC ਲਈ ਨਵੇਂ ਅਤੇ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ਇਲਾਜਾਂ ਦੀ ਪਛਾਣ ਕਰਨ ਲਈ ਜੀਨੋਮ-ਵਾਈਡ ਇਨ ਵੀਵੋ CRISPR ਸਕ੍ਰੀਨਿੰਗ ਦੀ ਸ਼ਕਤੀ ਅਤੇ ਮਜ਼ਬੂਤੀ ਨੂੰ ਉਜਾਗਰ ਕਰਦੇ ਹਨ (Dai et al., 2021)।
ਇਮਿਊਨ ਸਿਸਟਮ ਦਾ ਵਿਗੜਨਾ ਟਿਊਮਰਜਨੇਸਿਸ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਕਾਰਕ ਹੈ। ਕੈਂਸਰ ਸੈੱਲ ਰੱਖਿਆ ਵਿਧੀਆਂ ਨੂੰ ਬਾਈਪਾਸ ਕਰਕੇ ਇਮਿਊਨ ਕਲੀਅਰੈਂਸ ਤੋਂ ਬਚਦੇ ਹਨ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਟਿਊਮਰ ਸੂਖਮ ਵਾਤਾਵਰਣ ਵਿੱਚ ਇਮਿਊਨ ਸੈੱਲਾਂ ਦੀ ਗਤੀਵਿਧੀ ਵਿੱਚ ਦਖਲ ਦੇਣਾ ਅਤੇ ਇਮਿਊਨ ਸਿਸਟਮ ਨਾਲ ਸਮਝੌਤਾ ਕਰਨਾ ਸ਼ਾਮਲ ਹੈ। ਇਸ ਲਈ, ਇੱਕ ਬਿਹਤਰ ਇਮਿਊਨ ਸਿਸਟਮ ਵਿਕਸਤ ਕਰਨਾ ਟਿਊਮਰ ਨਾਲ ਲੜਨ ਲਈ ਇੱਕ ਮੁੱਖ ਪਹੁੰਚ ਹੋ ਸਕਦੀ ਹੈ। CRISPR/Cas9-ਅਧਾਰਤ ਜੀਨ ਸੋਧ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਦ੍ਰਿਸ਼ਟੀਕੋਣਾਂ ਤੋਂ ਇਮਿਊਨ ਨਪੁੰਸਕਤਾ ਨਾਲ ਸਬੰਧਤ ਕਈ ਮੁੱਦਿਆਂ ਨੂੰ ਸੰਬੋਧਿਤ ਕਰਦੀ ਹੈ। CRISPR/Cas9 ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਛਾਤੀ ਦੇ ਕੈਂਸਰ ਦੇ ਵਿਰੁੱਧ ਐਂਟੀਟਿਊਮਰ ਇਮਿਊਨਿਟੀ ਨੂੰ ਬਿਹਤਰ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਹੇਠ ਲਿਖੇ ਮਾਰਗਾਂ (ਚਿੱਤਰ 3) ਰਾਹੀਂ ਕੀਤੀ ਗਈ ਹੈ।
ਚਿੱਤਰ 3. CRISPR/Cas9 ਇਮਯੂਨੋਥੈਰੇਪੀ TNBC ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਬਣਾਉਂਦੀ ਹੈ। CDK5 ਦਾ ਨੁਕਸਾਨ ਅਤੇ PDL1 ਅਤੇ CD155 ਦਾ ਨਾਕਡਾਊਨ ਇਮਿਊਨ ਸਿਸਟਮ ਨੂੰ ਵਧਾਉਂਦਾ ਹੈ। ਇਸੇ ਤਰ੍ਹਾਂ, A2AR ਦਾ ਨੁਕਸਾਨ ਅਤੇ HER2, mucin 1 ਅਤੇ TEM8 ਵਰਗੇ TAAs ਦੇ ਨਾਕਡਾਊਨ ਨੇ ਕੈਂਸਰ ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਮਾਰਨ ਵਿੱਚ CAR-T ਸੈੱਲਾਂ ਦੀ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਨੂੰ ਵਧਾਇਆ। CRISPR/Cas9-ਸੰਚਾਲਿਤ T ਸੈੱਲ ਸਕ੍ਰੀਨਿੰਗ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਹੈ ਕਿ p38 kinase ਦੇ ਵਿਘਨ ਨੇ T ਸੈੱਲ ਐਂਟੀਟਿਊਮਰ ਗਤੀਵਿਧੀ ਨੂੰ ਵਧਾਇਆ ਹੈ। CRISPR/Cas9 ਦੁਆਰਾ ਸੋਧੇ ਗਏ T ਸੈੱਲ TCR (T ਸੈੱਲ ਰੀਸੈਪਟਰ) ਦੀ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਨੂੰ ਵਧਾਉਂਦੇ ਹਨ, ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ T ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਐਂਟੀਟਿਊਮਰ ਗਤੀਵਿਧੀ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।
ਇਮਯੂਨੋਥੈਰੇਪੀ ਦਾ ਟੀਚਾ ਇਮਿਊਨ ਸਿਸਟਮ ਨੂੰ ਕੈਂਸਰ ਸੈੱਲਾਂ 'ਤੇ ਹਮਲਾ ਕਰਨ ਲਈ ਉਤੇਜਿਤ ਕਰਨਾ ਹੈ। ਇਮਿਊਨ ਚੈੱਕਪੁਆਇੰਟ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦਾ ਓਵਰਐਕਸਪ੍ਰੈਸ਼ਨ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਆਟੋਇਮਿਊਨ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆਵਾਂ ਨੂੰ ਰੋਕਦਾ ਹੈ ਪਰ ਕੈਂਸਰਾਂ ਤੋਂ ਬਚਣ ਵਿੱਚ ਮਦਦ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ (ਟੋਪਾਲੀਅਨ ਐਟ ਅਲ., 2015)। ਇਹ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਇਮਿਊਨ ਸੈੱਲਾਂ ਦੀ ਸਤ੍ਹਾ 'ਤੇ ਰੀਸੈਪਟਰਾਂ ਨਾਲ ਜੁੜ ਕੇ ਇਮਿਊਨ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆਵਾਂ ਨੂੰ ਰੋਕਦੇ ਹਨ। ਮਲਟੀਪਲ ਚੈੱਕਪੁਆਇੰਟ ਪ੍ਰੋਟੀਨ (ਜਿਵੇਂ ਕਿ CD155 ਅਤੇ PD-L1) ਇਮਿਊਨ ਸੈੱਲਾਂ 'ਤੇ PD-1 ਰੀਸੈਪਟਰ ਨੂੰ ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਬਣਾਉਂਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਛਾਤੀ ਦੇ ਕੈਂਸਰ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਗਟ ਹੁੰਦੇ ਹਨ, ਖਾਸ ਕਰਕੇ TNBC (Li Y.-C. ਐਟ ਅਲ., 2020)। CRISPR/Cas9 ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ PD-L1 ਜਾਂ ਇਸਦੇ ਰੀਸੈਪਟਰ ਦਾ ਨਾਕਡਾਊਨ ਇਮਿਊਨ ਸਿਸਟਮ ਨੂੰ TNBC ਟਿਊਮਰ 'ਤੇ ਹਮਲਾ ਕਰਨ ਲਈ ਉਤੇਜਿਤ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ (Yahata et al., 2019)। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, CDK5 ਦੇ CRISPR/Cas9-ਵਿਚੋਲਗੀ ਮਿਟਾਉਣ ਦੁਆਰਾ PD-L1 ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਨੂੰ ਘਟਾਉਣਾ ਵਿਟਰੋ ਅਤੇ ਇਨ ਵਿਵੋ ਵਿੱਚ ਟਿਊਮਰ ਦੇ ਵਾਧੇ ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਲਈ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ (ਡੇਂਗ ਐਟ ਅਲ., 2020)। ਛਾਤੀ ਦੇ ਕੈਂਸਰ ਦੇ ਇਨ ਵਿਟਰੋ ਅਤੇ ਇਨ ਵੀਵੋ ਮਾਡਲਾਂ ਵਿੱਚ ਵਿਕਾਸ ਰੋਕ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦੀ ਹੈ ਕਿ CD155 ਦੀ shRNA-ਮੱਧਮਤਾ ਵਾਲੀ ਕਮੀ ਛਾਤੀ ਦੇ ਕੈਂਸਰ 'ਤੇ ਇਲਾਜ ਪ੍ਰਭਾਵ ਪਾ ਸਕਦੀ ਹੈ (ਗਾਓ ਐਟ ਅਲ., 2018)।
CAR T ਸੈੱਲ CARs ਨੂੰ ਪ੍ਰਗਟ ਕਰਦੇ ਹਨ ਜੋ ਟਿਊਮਰ ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਐਂਟੀਜੇਨ (TAAs) ਨੂੰ ਪਛਾਣਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਆਪਣੀ ਗਤੀਵਿਧੀ ਨੂੰ ਵਧਾਉਣ ਲਈ ਚੈੱਕਪੁਆਇੰਟ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੇ ਨਾਕਡਾਊਨ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਨ (Li C. et al., 2020)। ਛਾਤੀ ਦੇ ਕੈਂਸਰ ਵਿੱਚ CAR T ਸੈੱਲ ਥੈਰੇਪੀ ਲਈ ਕਈ ਸੰਭਾਵੀ ਟੀਚੇ ਹਨ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ HER2, mucin1, ਅਤੇ TEM8 (Bajgain et al., 2018) ਵਰਗੇ ਕਈ TAA ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ। ਇਸ ਗੱਲ ਦਾ ਸਬੂਤ ਹੈ ਕਿ ਮੇਸੋਥੈਲਿਨ (TNBC BT-459 ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਓਵਰਐਕਸਪ੍ਰੈਸਡ) ਨੂੰ ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਬਣਾਉਣ ਵਾਲੇ CAR T ਸੈੱਲ ਕੈਂਸਰ ਦੇ ਵਿਰੁੱਧ ਵਧੇਰੇ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ਹੁੰਦੇ ਹਨ ਜਦੋਂ PD-1 ਨੂੰ CRISPR/Cas9 (Hu et al., 2019) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਬਾਹਰ ਕੱਢਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਹਾਲਾਂਕਿ, ਮਰੀਜ਼ਾਂ ਤੋਂ T ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਅਲੱਗ ਕਰਨਾ ਅਤੇ ਫਿਰ ਉਹਨਾਂ ਨੂੰ ਐਕਸ ਵਿਵੋ ਵਿੱਚ ਸੰਪਾਦਿਤ ਕਰਨਾ ਇੱਕ ਮਿਹਨਤ-ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ ਅਤੇ ਸਮਾਂ-ਖਪਤ ਕਰਨ ਵਾਲੀ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਹੈ। ਹਾਲਾਂਕਿ ਯੂਨੀਵਰਸਲ T ਸੈੱਲ ਆਈਸੋਲੇਸ਼ਨ ਜ਼ਰੂਰਤਾਂ ਨੂੰ ਘਟਾ ਸਕਦੇ ਹਨ, ਗ੍ਰਾਫਟ-ਬਨਾਮ-ਹੋਸਟ ਅਸਧਾਰਨਤਾਵਾਂ ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਲਈ ਮਨੁੱਖੀ ਲਿਊਕੋਸਾਈਟ ਐਂਟੀਜੇਨ (HLA) ਕਲਾਸ I ਅਤੇ T ਸੈੱਲ ਰੀਸੈਪਟਰ (TCR) ਨੂੰ ਪ੍ਰਗਟ ਕਰਨ ਵਾਲੇ ਦਾਨੀ T ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਹਟਾ ਦਿੱਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ (Ren et al., 2017)। , 2017a)। CRISPR/Cas9 ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ, HDR ਇੱਕੋ ਸਮੇਂ TCR ਅਤੇ HLA ਨੂੰ ਖਤਮ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ ਅਤੇ CAR ਨੂੰ ਏਨਕੋਡਿੰਗ ਕਰਨ ਵਾਲੇ ਜੀਨ ਨੂੰ ਬਾਹਰ ਕੱਢ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਅਧਿਐਨਾਂ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਹੈ ਕਿ CRISPR/Cas9 ਦੀ ਵਰਤੋਂ TCR ਲੋਕਸ ਵਿੱਚ ਐਂਟੀ-CD19 CARs ਨੂੰ ਪੇਸ਼ ਕਰਨ ਲਈ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ, ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ T ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਖਤਮ ਕੀਤੇ ਬਿਨਾਂ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਨਾਲ CARs ਪੈਦਾ ਕਰਦੇ ਹਨ (Dimitri et al., 2022)। ਮਲਟੀਪਲੈਕਸ ਤਕਨਾਲੋਜੀਆਂ ਨੂੰ TCR, ਬੀਟਾ-2-ਮਾਈਕ੍ਰੋਗਲੋਬੂਲਿਨ (B2M), HLA-I ਸਬਯੂਨਿਟ ਅਤੇ PD-1 ਅਤੇ CTLA-4 ਵਰਗੇ ਹੋਰ ਪ੍ਰੋਟੀਨਾਂ ਨੂੰ ਇੱਕੋ ਸਮੇਂ ਖਤਮ ਕਰਕੇ ਐਲੋਜੀਨਿਕ CAR T ਸੈੱਲ ਪੈਦਾ ਕਰਨ ਲਈ ਵਿਕਸਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ, ਜਿਨ੍ਹਾਂ ਵਿੱਚ TNBC ਦੇ ਵਿਰੁੱਧ ਵਧੇਰੇ ਕੈਂਸਰ ਵਿਰੋਧੀ ਗੁਣ ਹੋ ਸਕਦੇ ਹਨ (Eyquem et al., 2017; Liu et al., 2017; Ren et al., 2017b; Dimitri et al., 2022)।
CRISPR/Cas9 ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨ ਨਾਲ CAR-T ਸੈੱਲਾਂ ਦੀ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ੀਲਤਾ ਵਿੱਚ ਸੁਧਾਰ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਐਡੀਨੋਸਾਈਨ ਵਿੱਚ ਇਮਯੂਨੋਸਪ੍ਰੈਸਿਵ ਗੁਣ ਹੁੰਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਇਹ T ਸੈੱਲ ਫੰਕਸ਼ਨ ਨੂੰ ਰੋਕ ਕੇ ਅਤੇ ਐਡੀਨੋਸਾਈਨ A2A ਰੀਸੈਪਟਰਾਂ (A2AR) ਨੂੰ ਸਰਗਰਮ ਕਰਕੇ ਕੈਂਸਰ ਵਿਰੋਧੀ ਪ੍ਰਤੀਰੋਧਕ ਸ਼ਕਤੀ ਨੂੰ ਘਟਾ ਸਕਦਾ ਹੈ (ਵਿਗਾਨੋ ਐਟ ਅਲ., 2019)। CRISPR/Cas9 ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ A2AR ਨੂੰ ਚੁੱਪ ਕਰਨ ਨਾਲ ਵਿਵੋ ਵਿੱਚ CAR-T ਸੈੱਲਾਂ ਦੀ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ੀਲਤਾ ਵਿੱਚ ਕਾਫ਼ੀ ਸੁਧਾਰ ਹੋਇਆ ਹੈ (Giuffrida et al., 2021)। ਟੀ ਸੈੱਲ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਫੀਨੋਟਾਈਪਿਕ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾਵਾਂ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਸੈਲੂਲਰ ਵਿਸਥਾਰ, ਵਿਭਿੰਨਤਾ, ਆਕਸੀਡੇਟਿਵ ਤਣਾਅ ਅਤੇ ਜੀਨੋਮਿਕ ਤਣਾਅ ਨੂੰ ਪ੍ਰਦਰਸ਼ਿਤ ਕਰਨ ਲਈ ਜਾਣੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ। CRISPR/Cas9-ਅਧਾਰਤ T ਸੈੱਲ ਸਕ੍ਰੀਨਿੰਗ ਨੇ 25 ਵੱਖ-ਵੱਖ T ਸੈੱਲ ਰੀਸੈਪਟਰ ਕਾਇਨੇਸ ਦੇ ਵਿਘਨ ਦਾ ਖੁਲਾਸਾ ਕੀਤਾ। ਉਨ੍ਹਾਂ ਵਿੱਚੋਂ, p38 ਕਾਇਨੇਸ ਨੂੰ ਮਿਟਾਉਣ ਨਾਲ T ਸੈੱਲਾਂ ਦੀ ਐਂਟੀਟਿਊਮਰ ਗਤੀਵਿਧੀ ਨੂੰ ਵਧਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ, ਜੋ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ ਕਿ p38 ਕਾਇਨੇਸ CAR-T ਸੈੱਲ ਨਿਯਮਨ ਦਾ ਇੱਕ ਮੁੱਖ ਰੈਗੂਲੇਟਰ ਹੈ (ਗੁਰੂਸਾਮੀ ਐਟ ਅਲ., 2020)।
ਟੀ ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਜੈਨੇਟਿਕ ਤੌਰ 'ਤੇ CRISPR/Cas9 ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਜੈਨੇਟਿਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸੋਧਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਤਾਂ ਜੋ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਪ੍ਰਗਟ ਕੀਤੇ ਗਏ TCR ਪੈਦਾ ਕੀਤੇ ਜਾ ਸਕਣ। ਮਰੀਜ਼ਾਂ ਨੂੰ ਜੈਨੇਟਿਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸੋਧੇ ਹੋਏ T ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਕਰਨ ਨਾਲ ਐਂਡੋਜੇਨਸ T ਸੈੱਲਾਂ ਨਾਲੋਂ ਵਧੇਰੇ ਮਜ਼ਬੂਤ ​​ਕੈਂਸਰ ਵਿਰੋਧੀ ਗਤੀਵਿਧੀ ਦਿਖਾਈ ਗਈ ਹੈ। ਇਸ ਲਈ, ਐਂਡੋਜੇਨਸ TCR ਮਰੀਜ਼ਾਂ ਵਿੱਚ ਜੈਨੇਟਿਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਬਦਲੇ ਹੋਏ TCRs ਨਾਲ ਮੁਕਾਬਲਾ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਨ, ਜੋ ਕੈਂਸਰ ਇਮਯੂਨੋਥੈਰੇਪੀ ਦੀ ਸੰਭਾਵਨਾ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਤ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਸਮੱਸਿਆ ਨੂੰ ਦੂਰ ਕਰਨ ਲਈ, CRISPR/Cas9 ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਪ੍ਰਾਪਤਕਰਤਾ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਐਂਡੋਜੇਨਸ TCR-β ਨੂੰ ਹਟਾਉਣ ਅਤੇ ਬਾਅਦ ਵਿੱਚ ਕੈਂਸਰ ਦੇ ਮਰੀਜ਼ਾਂ ਵਿੱਚ TCR-β T ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਕਰਨ ਨਾਲ ਐਂਡੋਜੇਨਸ TCR ਜਿਨਸੀ ਮੁਕਾਬਲੇ ਦੀ ਲੋੜ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਬਿਹਤਰ ਕੈਂਸਰ ਵਿਰੋਧੀ ਪ੍ਰਤੀਰੋਧਕ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆਵਾਂ ਪ੍ਰਦਰਸ਼ਿਤ ਹੋ ਸਕਦੀਆਂ ਹਨ (ਫੈਨ ਐਟ ਅਲ. 2018)। ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ, CRISPR-ਸੋਧੇ ਹੋਏ T ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਅਪਵਾਦ ਦੇ ਨਾਲ, TCR ਆਮ TCR-ਟ੍ਰਾਂਸਡਿਊਸਡ T ਸੈੱਲਾਂ ਨਾਲੋਂ ਟਿਊਮਰ ਐਂਟੀਜੇਨ ਪ੍ਰਤੀ ਹਜ਼ਾਰ ਗੁਣਾ ਜ਼ਿਆਦਾ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ ਹੁੰਦੇ ਹਨ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਵੱਖ-ਵੱਖ ਲਿਊਕੇਮੀਆ ਵਿੱਚ, γδ TCR+ CRISPR ਦੁਆਰਾ ਤਿਆਰ ਕੀਤੇ ਗਏ ਬਦਲੇ ਹੋਏ T ਸੈੱਲ ਮਿਆਰੀ TCR ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ (Legut et al., 2018) ਨਾਲੋਂ CD4+ ਅਤੇ CD8+ T ਸੈੱਲਾਂ ਦੀ ਉੱਚ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਨੂੰ ਪ੍ਰਦਰਸ਼ਿਤ ਕਰਦੇ ਹਨ। ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ, CRISPR/Cas9 ਦੁਆਰਾ ਤਿਆਰ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸੋਧੇ ਹੋਏ ਟੀ ਸੈੱਲ TNBC ਨੂੰ ਦੂਰ ਕਰਨ ਲਈ ਇੱਕ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ਇਮਯੂਨੋਥੈਰੇਪੀ ਵਿਧੀ ਹੋ ਸਕਦੇ ਹਨ।
ਇੰਟੀਗ੍ਰੀਨ ਸੈੱਲ ਅਡੈਸ਼ਨ ਅਣੂ ਹਨ ਜੋ ਸੈਲੂਲਰ ਟ੍ਰਾਂਸਮੇਂਬ੍ਰੇਨ ਵਿੱਚ ਮੌਜੂਦ ਹੁੰਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਐਕਸਟਰਸੈਲੂਲਰ ਮੈਟ੍ਰਿਕਸ (ECM) ਨਾਲ ਜੋੜਨ ਨੂੰ ਉਤਸ਼ਾਹਿਤ ਕਰਦੇ ਹਨ (ਹਾਮਿਦੀ ਅਤੇ ਇਵਾਸਕਾ, 2018)। ਇੰਟੀਗ੍ਰੀਨ ਦਾ ਵਿਘਨ ਕੈਂਸਰ ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਅਤੇ ਮਾਈਗ੍ਰੇਸ਼ਨ ਨਾਲ ਜੁੜਿਆ ਹੋਇਆ ਹੈ, ਐਕਸਟਰਸੈਲੂਲਰ ਮੈਟ੍ਰਿਕਸ ਨੂੰ ਬਦਲ ਕੇ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਸਰਕੂਲੇਸ਼ਨ ਵਿੱਚ ਕੈਂਸਰ ਸੈੱਲਾਂ ਦਾ ਬਚਾਅ ਹੁੰਦਾ ਹੈ (ਹਾਮਿਦੀ ਅਤੇ ਇਵਾਸਕਾ, 2018)। CRISPR/Cas9-ਮਾਧਿਅਮ ਵਾਲਾ ਇੰਟੀਗ੍ਰੀਨ ਨੌਕਡਾਊਨ TNBC ਵਿੱਚ ਟਿਊਮਰ ਦੀ ਪ੍ਰਗਤੀ, ਮੈਟਾਸਟੇਸਿਸ ਅਤੇ ਕੋਲੋਨਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਹੌਲੀ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਇੰਟੀਗ੍ਰੀਨ a5 (ITGA5) ਦੇ ਨਾਕਡਾਊਨ ਦੀ ਰਿਪੋਰਟ ਫੇਫੜਿਆਂ ਦੇ ਕੈਂਸਰ (Ju et al., 2017) ਵਰਗੇ ਹੋਰ ਕੈਂਸਰਾਂ ਵਿੱਚ ਸੈੱਲ ਮਾਈਗ੍ਰੇਸ਼ਨ ਅਤੇ ਪ੍ਰਗਤੀ ਨੂੰ ਘਟਾਉਣ ਲਈ ਕੀਤੀ ਗਈ ਹੈ, ਜੋ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦਾ ਹੈ ਕਿ ਇੰਟੀਗ੍ਰੀਨ a5 TNBC ਦੇ ਰੋਗਜਨਨ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਮੁੱਖ ਕਾਰਕ ਵੀ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ।
ਰਵਾਇਤੀ ਭਰੂਣ ਸਟੈਮ (ES) ਸੈੱਲ ਤਰੀਕਿਆਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਨਾਕਆਊਟ ਚੂਹੇ ਪੈਦਾ ਕਰਨਾ ਇੱਕ ਮਿਹਨਤ-ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ, ਸਮਾਂ-ਖਪਤ ਕਰਨ ਵਾਲੀ, ਅਤੇ ਅਕੁਸ਼ਲ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਹੈ। ਸਮਰੂਪ ਪੁਨਰ-ਸੰਯੋਜਨ ਦੁਆਰਾ ES ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਬਣਾਉਣ, ਚਾਈਮੇਰਿਕ ਚੂਹਿਆਂ ਨੂੰ ਪ੍ਰਜਨਨ ਕਰਨ, ਅਤੇ ਫਿਰ ਸਮਰੂਪ ਔਲਾਦ ਪੈਦਾ ਕਰਨ ਲਈ ਉਹਨਾਂ ਨੂੰ ਹੇਟਰੋਜ਼ਾਈਗਸ ਚੂਹਿਆਂ ਨਾਲ ਪਾਰ ਕਰਨ ਵਿੱਚ ਮਹੀਨੇ ਅਤੇ ਸਾਲ ਲੱਗਦੇ ਹਨ। ਕਈ ਜੈਨੇਟਿਕ ਪਰਿਵਰਤਨ ਵਾਲੇ ਚੂਹੇ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਗੁੰਝਲਦਾਰ ਕਰਾਸਬ੍ਰੀਡਿੰਗ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ। ਹਾਲਾਂਕਿ, CRISPR/Cas9 ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ES ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਐਬਲੇਸ਼ਨ ਦੁਆਰਾ ਜਾਂ CRISPR/Cas9 ਹਿੱਸਿਆਂ ਨੂੰ ਸਿੰਗਲ-ਸੈੱਲ ਉਪਜਾਊ ਅੰਡਿਆਂ ਵਿੱਚ ਮਾਈਕ੍ਰੋਇੰਜੈਕਟ ਕਰਕੇ ਪੈਦਾ ਹੋਏ ਚੂਹਿਆਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨ ਵੇਲੇ ਬਹੁਤ ਸਾਰੀਆਂ ਸਮੱਸਿਆਵਾਂ ਪੈਦਾ ਹੋਈਆਂ ਹਨ। ਉਦਾਹਰਣ ਵਜੋਂ, ਤਬਦੀਲੀਆਂ ਦੀ ਸ਼ੁਰੂਆਤ ਅਕਸਰ ਬਾਇਲੇਲਿਕ ਲੋਕੀ 'ਤੇ ਹੁੰਦੀ ਹੈ ਅਤੇ ਇਹ ਜੀਨ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਨਹੀਂ ਹੁੰਦੀ ਹੈ। ਹਾਲ ਹੀ ਵਿੱਚ ਇਹ ਰਿਪੋਰਟ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ ਕਿ CRISPR/Cas9 ਤਕਨਾਲੋਜੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ES ਸੈੱਲ ਇੱਕੋ ਸਮੇਂ 5 ਜੀਨਾਂ ਵਿੱਚ ਬਾਇਲੇਲਿਕ ਪਰਿਵਰਤਨ ਪਾ ਸਕਦੇ ਹਨ (ਨਿਸ਼ੀਜ਼ੋਨੋ ਐਟ ਅਲ., 2021)। ਇਸ ਉਦੇਸ਼ ਲਈ, Cas9 mRNA ਅਤੇ ਪੰਜ ਜੀਨ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ gRNAs ਨੂੰ ਇੱਕੋ ਸਮੇਂ ES ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਟ੍ਰਾਂਸਫੈਕਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਇਹ ਇਸ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਦੇ ਵਾਅਦੇ ਅਤੇ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ੀਲਤਾ ਨੂੰ ਉਜਾਗਰ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਹਾਲਾਂਕਿ ਇਹ ਪਰਿਵਰਤਨ ਉਦੋਂ ਪਾਸ ਹੋਏ ਹੋਣਗੇ ਜਦੋਂ ਫਾਊਂਡਰ ਲਾਈਨਾਂ ਨੂੰ ਕੁਇੰਟਪਲ ਨਾਕਆਊਟ ਚੂਹੇ ਪੈਦਾ ਕਰਨ ਲਈ ਪੈਦਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਅਧਿਐਨ ਇੱਕ ਹੈਰਾਨੀਜਨਕ ਖੋਜ ਦੀ ਵੀ ਰਿਪੋਰਟ ਕਰਦਾ ਹੈ: ES ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਹੁਣ ਜੈਨੇਟਿਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸੋਧੇ ਹੋਏ ਚੂਹੇ ਬਣਾਉਣ ਦੀ ਲੋੜ ਨਹੀਂ ਹੈ। ਇਸ ਦੀ ਬਜਾਏ, ਖਾਸ ਜੀਨ ਉਤਪਾਦਾਂ ਨੂੰ ਹਟਾਉਣ ਲਈ, Cas9 mRNA ਅਤੇ gRNA ਨੂੰ ਸਿੰਗਲ-ਸੈੱਲ ਸਟੇਜ ਭਰੂਣਾਂ ਵਿੱਚ ਟੀਕਾ ਲਗਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ, ਨਾਕਆਊਟ ਫਾਊਂਡਰ ਲਾਈਨਾਂ ਬਣਾਈਆਂ ਗਈਆਂ ਹਨ ਜੋ ਸਿਧਾਂਤਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਚੂਹਿਆਂ ਵਿੱਚ ਜੀਨ ਮਿਟਾਉਣ ਦੇ ਨਤੀਜਿਆਂ ਦਾ ਅਧਿਐਨ ਕਰਨ ਲਈ ਵਰਤੀਆਂ ਜਾ ਸਕਦੀਆਂ ਹਨ (ਕਿਨ ਐਟ ਅਲ., 2016)। ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ, CRISPR/Cas9 ਰਵਾਇਤੀ ਜੈਨੇਟਿਕ ਇੰਜੀਨੀਅਰਿੰਗ ਨਾਲੋਂ ਘੱਟ ਕੀਮਤ 'ਤੇ TNBC ਦਾ ਇਲਾਜ ਕਰਨ ਲਈ ਟ੍ਰਾਂਸਜੈਨਿਕ ਚੂਹਿਆਂ ਦੀ ਸਿਰਜਣਾ ਦੀ ਆਗਿਆ ਦਿੰਦਾ ਹੈ। CRISPR/Cas ਸਿਸਟਮ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ, ਇੱਕ ਨਵਾਂ ਨਾਕਆਊਟ ਮਾਊਸ ਮਾਡਲ ਵਿਕਸਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ ਜੋ TNBC ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਜਾਂ ਇੱਕ ਤੋਂ ਵੱਧ ਐਂਡੋਜੇਨਸ ਜੀਨਾਂ ਵਿੱਚ ਬਿੰਦੂ ਪਰਿਵਰਤਨ ਨੂੰ ਸਫਲਤਾਪੂਰਵਕ ਪੇਸ਼ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਸੰਕਲਪ ਦੇ ਅਧਾਰ ਤੇ, BRCA1 ਅਤੇ p53 ਦੇ CRISPR/Cas9-ਮੱਧਮ ਮਿਟਾਉਣ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ TNBC ਦੇ ਜਾਨਵਰ ਮਾਡਲ ਵੀ ਵਿਕਸਤ ਕੀਤੇ ਜਾ ਸਕਦੇ ਹਨ, ਜਿਸਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ HR ਮੁਰੰਮਤ ਦਾ ਨੁਕਸਾਨ, ਜੀਨੋਮਿਕ ਅਸਥਿਰਤਾ, ਅਤੇ ਪਰਿਵਰਤਨਸ਼ੀਲ ਫੀਨੋਟਾਈਪ (Annunziato et al., 2020)।
ਵਰਤਮਾਨ ਵਿੱਚ, TNBC ਦਾ ਨਿਦਾਨ ਕਰਨ ਲਈ ਮੈਮੋਗ੍ਰਾਫੀ, ਮੈਗਨੈਟਿਕ ਰੈਜ਼ੋਨੈਂਸ ਇਮੇਜਿੰਗ (MRI) ਅਤੇ ਅਲਟਰਾਸਾਊਂਡ ਵਰਗੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਤਰੀਕਿਆਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ। ਹਾਲਾਂਕਿ, ਇਹਨਾਂ ਤਰੀਕਿਆਂ ਦੀਆਂ ਕੁਝ ਸੀਮਾਵਾਂ ਹਨ। ਮੈਮੋਗ੍ਰਾਫੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਮੈਟਾਸਟੈਸੇਸ ਦੀ ਬਜਾਏ ਸਥਾਨਕ ਛਾਤੀ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ ਦਾ ਨਿਦਾਨ ਕਰਨ ਲਈ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਜਿੱਥੇ ਕੈਂਸਰ ਸੈੱਲ ਦੂਜੇ ਅੰਗਾਂ ਵਿੱਚ ਚਲੇ ਗਏ ਹਨ। ਅਲਟਰਾਸੋਨੋਗ੍ਰਾਫੀ TNBC ਦਾ ਨਿਦਾਨ ਕਰਨ ਲਈ ਇੱਕ ਭਰੋਸੇਯੋਗ ਤਰੀਕਾ ਨਹੀਂ ਹੈ (ਚੇਨ ਅਤੇ ਲੀ-ਫੇਲਕਰ, 2023)। MRI ਵਿੱਚ ਅਲਟਰਾਸਾਊਂਡ ਅਤੇ ਮੈਮੋਗ੍ਰਾਫੀ ਨਾਲੋਂ ਵੱਧ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ ਹੈ, ਪਰ ਇਸਦੀ ਡਾਇਗਨੌਸਟਿਕ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਸੀਮਤ ਹੈ (ਸ਼ਾ ਅਤੇ ਚੇਨ, 2022)। ਟਿਸ਼ੂ ਬਾਇਓਪਸੀ ਕੈਂਸਰ ਸੈੱਲਾਂ ਦੀ ਪਛਾਣ ਕਰਨ ਦਾ ਇੱਕ ਹਮਲਾਵਰ ਤਰੀਕਾ ਹੈ। ਹਾਲਾਂਕਿ, ਕੁਝ ਮਾਮਲਿਆਂ ਵਿੱਚ, ਜੇਕਰ ਸੂਈ ਦਿਲਚਸਪੀ ਵਾਲੇ ਖੇਤਰ ਤੋਂ ਦੂਰ ਭਟਕ ਜਾਂਦੀ ਹੈ ਤਾਂ ਇੱਕ ਬਾਇਓਪਸੀ ਕੈਂਸਰ ਵਾਲੇ ਟਿਸ਼ੂ ਨੂੰ ਗੁਆ ਸਕਦੀ ਹੈ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਇਹ ਬਹੁਤ ਮਹਿੰਗਾ ਹੈ ਅਤੇ ਮਰੀਜ਼ ਲਈ ਦੁਖਦਾਈ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ। TNBC ਇੱਕ ਵਿਭਿੰਨ ਕਿਸਮ ਦਾ ਕੈਂਸਰ ਹੈ, ਇਸ ਲਈ ਇੱਕ ਬਾਇਓਪਸੀ ਕੈਂਸਰ ਦੀ ਕਿਸਮ ਬਾਰੇ ਕਾਫ਼ੀ ਜਾਣਕਾਰੀ ਪ੍ਰਦਾਨ ਨਹੀਂ ਕਰ ਸਕਦੀ। ਇਸ ਲਈ, TNBC ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾਉਣ ਲਈ ਇੱਕ ਨਵੇਂ ਡਾਇਗਨੌਸਟਿਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਭਰੋਸੇਯੋਗ ਢੰਗ ਦੀ ਤੁਰੰਤ ਲੋੜ ਹੈ। CRISPR/Cas9 ਛਾਤੀ ਦੇ ਕੈਂਸਰ ਦੇ ਨਿਦਾਨ ਲਈ ਇੱਕ ਬਹੁਤ ਹੀ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ ਅਤੇ ਘੱਟੋ-ਘੱਟ ਹਮਲਾਵਰ ਵਿਕਲਪ ਵਜੋਂ ਕੰਮ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਉਦੇਸ਼ ਲਈ, TNBC ਦੇ ਨਿਦਾਨ ਲਈ PCR ਤਰੀਕਿਆਂ ਨੂੰ ਬਿਹਤਰ ਬਣਾਉਣ ਲਈ CRISPR/Cas9-ਅਧਾਰਿਤ ਰਣਨੀਤੀਆਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ। ਪਹਿਲਾਂ, CRISPR ਸਿਸਟਮ ਦੇ Cas9 ਅਤੇ cpf1 ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਗੈਰ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ DNA ਨੂੰ ਹਟਾਉਣ ਲਈ ਵਰਤੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ, ਅਤੇ ਫਿਰ ਇਹ ਦੋ ਪ੍ਰੋਟੀਨ (Cas9 ਅਤੇ cpf1) ਟੀਚੇ ਵਾਲੇ DNA (ਦੀਪਕ ਸਿੰਘ ਐਟ ਅਲ., 2021) ਨਾਲ ਜੁੜਨ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ PAM ਕ੍ਰਮ ਨੂੰ ਪਛਾਣ ਸਕਦੇ ਹਨ। . ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ, PCR ਕੈਂਸਰ ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਪਰਿਵਰਤਨ ਦੀ ਪਛਾਣ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਕਈ ਅਧਿਐਨਾਂ ਨੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਕੈਂਸਰਾਂ ਵਿੱਚ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਪਰਿਵਰਤਨਾਂ ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾਉਣ ਲਈ ਇਸ CRISPR-ਅਧਾਰਿਤ ਰਣਨੀਤੀ ਨੂੰ ਅਪਣਾਇਆ ਹੈ (ਸਫਾਰੀ ਐਟ ਅਲ., 2019)। ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ, CRISPR-ਅਧਾਰਿਤ PCR ਤਰੀਕੇ ਬਾਇਓਪਸੀ-ਅਧਾਰਿਤ ਇਮਯੂਨੋਹਿਸਟੋਕੈਮਿਸਟਰੀ ਵਰਗੇ ਹਮਲਾਵਰ ਤਰੀਕਿਆਂ 'ਤੇ TNBC ਨਿਦਾਨ ਦੀ ਨਿਰਭਰਤਾ ਨੂੰ ਘਟਾ ਸਕਦੇ ਹਨ।
ਹਾਰਮੋਨ ਰੀਸੈਪਟਰ ਰੈਗੂਲੇਸ਼ਨ ਵਿੱਚ ਜੀਨੋਟਾਈਪਿਕ ਬਦਲਾਅ TNBC (ਚੇਨ ਅਤੇ ਰੂਸੋ, 2009) ਵਿੱਚ ਵੀ ਪ੍ਰਦਰਸ਼ਿਤ ਕੀਤੇ ਗਏ ਹਨ। ਪੁਆਇੰਟ-ਆਫ-ਕੇਅਰ ਡਾਇਗਨੌਸਟਿਕਸ ਲਈ ਮਾਈਕ੍ਰੋਐਰੇ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ CRISPR/Cas9-ਅਧਾਰਿਤ PCR ਰਣਨੀਤੀਆਂ ਇਹਨਾਂ ਪਰਿਵਰਤਨਾਂ ਦੀ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ਢੰਗ ਨਾਲ ਨਿਗਰਾਨੀ ਕਰ ਸਕਦੀਆਂ ਹਨ (ਹਾਜੀਅਨ ਐਟ ਅਲ., 2019)। ਇਹ ਸਿਹਤ ਸੰਭਾਲ ਪ੍ਰਦਾਤਾਵਾਂ ਨੂੰ TNBC ਮਰੀਜ਼ਾਂ ਵਿੱਚ ਖਾਸ ਪਰਿਵਰਤਨਾਂ ਬਾਰੇ ਸੰਬੰਧਿਤ ਜਾਣਕਾਰੀ ਵੀ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਜੋ ਉਨ੍ਹਾਂ ਦੇ ਇਲਾਜ ਦੇ ਕੋਰਸ ਨੂੰ ਬਿਹਤਰ ਬਣਾਉਣ ਵਿੱਚ ਮਦਦ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਹਾਲਾਂਕਿ, ਇਸ ਸੰਯੁਕਤ ਤਕਨੀਕ ਦੀਆਂ ਸੀਮਾਵਾਂ ਹਨ। ਇਸ ਲਈ, TNBC (ਯਾਂਗ ਐਟ ਅਲ., 2019) ਦੇ ਨਿਦਾਨ ਲਈ ਸਿਹਤ ਸੰਭਾਲ ਵਿੱਚ ਇਸ CRISPR/Cas-PCR ਵਿਧੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਵਿਆਪਕ ਖੋਜ ਯਤਨਾਂ ਦੀ ਲੋੜ ਹੈ।